2018届二轮复习基因工程和克隆技术学案（江苏专用）

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1、2018届二轮复习基因工程和克隆技术学案1.基因工程的基本工具（填图）圧因工程的肚本工JIDNA连接的在两个核冇酸之间形成国磷酸二弗逊以连接册个DNA片段敎体X^/Eco/*DNA连接倚:连接g］黏性末瑞t4dna连接陽：既能连接黏性末端也能连接⑤平末端/Sgp⑥质粒、入噬菌体的衍生物、国动植物病畝?;能白我复制;冇•个至多个囲限制爾切的条件割位点:右特殊的凰标记基因2.基因工程的基本操作程序（填空）（1）目的基因的获取途径:方法具体操作直接分离从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取人工合成化学合成已知

2、核昔酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板逆转录法以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成PCR技术扩增①原理：DNA复制②条件：模板DNA、引物、脱氧核昔酸、热稳定的DNA聚合酶［变性：9（）〜95°C,DNA解旋金+口复性：55〜60°C,②引物与单链DNA结合延伸：70〜75°C,在⑧热稳定的DNA聚合酶作用下合成子链（2）基因表达载体的构建——重组质粒的构建：①表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因+复制原点。②启动子和终止子：启动子是RNA聚合酶结合位点,启动转

3、录；终止子是终止转录的位点。（3）将目的基因导入受体细胞:植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法、基因显微注射技术感受态细胞法（用CJ+处理）枪法、花粉管通道法受体细胞受精卵、体细胞受精卵原核细胞（4）目的基因的检测与鉴定：①导入检测：DNA分子杂交技术（使用DNA探针）。'转录检测：分子杂交技术检测mRNA②表达检测｛翻译检测：用相应的抗体进行抗原一抗体杂交③个体生物学水平鉴定：如对转基因作物进行抗虫或抗病等接种实验。3・蛋白质工程（填图）卑因修饰或皿因合成操作手段改造现冇蛋白质,或制造出圍新的蛋白

4、质结果蛋白质工程；预期蛋白质的功能*:设计预期的S）蛋白质结构12世•II推测应冇的気荃酸序列;I1找到相对应的3］脱値核茁1酸序列（基因〉•■I二、细胞工程1.植物细胞工程的基本技术（填图）丨外植体酸乜』愈伤组织再分化“胚状体或丛芽坯榊株1I■■・・・■・•基本过租楼物组织培养技术榊物体细胞杂交技术2.3・〔制备团廉生质体一业」顶体融合吨杂利细胞一愈伤组织一⑥杂种根株:、■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■・

5、动物细胞培养（填图）4.动物细胞融合与单克隆抗体（填图）考点匚棗壬应(亟》旦巫画远二晅'二寢玄卫蜜%方法濟殛唾錘普越亟畛牟勰躍肾:团特异性强、:⑤灵敏度航:并可大ht制备L应用一一=亡皿作为⑥诊断试剂＜&抗体产冬用于治疗疾構1rr-T!和因运载药物•制备:B淋巴细胞的瘤细胞fH杂交痫细胞f单克隆抗体11高频考点®—包在内(方向比勞力丈重要)［考什么考点•考法探究］考点(一)基因工程的操作工具、原理及应用1・将经过扩增的DNA和质粒用相同的限制酶进行如右图所示的切割，电泳得到纯净的B片段和D片段，将两种片段置于

6、适宜的缓冲液中用DNA连接酶处理。如果只考虑两个片段的环状连接，则能形成不同核昔酸序列的环状DNA的种类是(A.6种B.3种C.2种D.1种解析：选A只考虑两个片段的环状连接,能形成的环状DNA有B片段与B片段同向连接的、B片段与B片段反向连接的、D片段与D片段同向连接的、D片段与D片段反向连接的、B片段与D片段同向连接的及B片段与D片段反向连接的，共6种。I联知识I基因工程中的限制酶和DNA连接酶(1)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。限制酶是一类酶，不是一种酶。限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要

7、适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。(2)在切割含目的基因的DNA分子时，需用限制酶切割两次此DNA分子，产生4个末端。(3)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是脱氧核昔酸之间的磷酸二酯键(不是氢键)，只是一个切开，一个连接。限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。(4)限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对目的基因的检测。⑸为使目的基因与载体形成相同的DNA片段末端连接，通常使用同一种限制酶将二者切割

8、，但如果不同的限制酶切割DNA分子所产生的末端也存在互补关系时，则两末端也可连接。用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接。1.(2017江苏髙考)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：模板I)N