2017-2018学年高二生物人教版选修一教学案：专题5+课题3+血红蛋白的提取和分离+word版含答案

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1、课題3血红妥自的提取和分富预习导引区核心必记重点聚焦预读教材，记住关镇初步构建知识框架掩卷思考，明确目标钳定课堂努力方向一、蛋白质提取、分离(阅读教材P64〜66)1.蛋白质分离的理论依据分子的形状和大小所带电倚的性质和多少蛋白质各种特性的差异彳涪解度吸附性质对其他分子的亲柯力2.凝胶色谱法(分配色谱法)(1)概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。(2)分离原理相对分子质量辿的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长,移动速度较慢；相对分子质量较左的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短,移动速度较快。［形态：徽小的多孔球体(3)凝胶｛组成：

2、大多数由多耦类化合物构成〔结构：内部有许多贯穿的通道3.缓冲溶液(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制外界酸和碱对溶液dH的影响,维持pH基本不变。(2)配制：通常由1〜2种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内的缓冲液。4.电泳(1)概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。(2)原理①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③电泳利用了待分离样品屮各种分子带电性质的差界以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子

3、产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。二、血红蛋白的提取和分离(阅读教材P66〜70)1•样品处理(1)红细胞的洗涤①目的：去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。①过程：分离(低速短时间离心)f用胶头吸管吸岀上层透明的黄色血浆f下层暗红色的红细胞用生理盐水洗涤(如此重复三次)。(1)血红蛋白的释放①目的：使红细胞破裂释放血红蛋片。②过程红细胞在磁力搅样器上血红蛋充分搅拌10min~白肆放+到原血液体积蒸惚水+》40%体积的甲苯(2)分离血红蛋白溶液：离心(以2000r/min速度，离心10min)观察到离心管中的溶液分为4层，从上往下依次为：第1层：无色透明的

4、甲苯层。第2层：脂溶性物质的沉淀层——白色薄层固体。笫3层：血红蛋白的水溶液——红色透明液体。第4层：其他杂质的Jf红色沉淀物。将液体用滤纸过滤,除去脂溶性沉淀层,于分液漏斗屮静置片刻后,分岀下层的红色透璽液体。2.透析一一粗分离过程：4X1mL的血红蛋片溶液装入透析袋中,将透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为20mmolL-1的磷酸缓冲液中(pH=7.0),透析12ho3.纯化——凝胶色谱操作制作凝胶色谱柱一装填凝胶色谱柱一样品的加入和洗脱。4.纯度鉴定鉴定方法屮使用最多的是SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳。1・凝胶鱼谱法的原理和方法是什么？2•城冲液的制备及作用是什么？

5、3.妥白质纯度鉴定的方法一电泳法的取理是什么？4•提取和分离血液中血红妥白的基本过程和方法是什么？共研探究—1——师生互动•步步探究稳根基总结升华—1——全面概括，尊渎熟记全突破:对点演练—申时乳固，讯学即用逹提能探究点一财0%."师生共研突*t至难课堂互动区蛋白质的分离技术［非罚探究］生物体内的蛋白质多种多样，分离蛋白质常使用的方法是凝胶色谱法和电泳法，都是根据不同蛋白质分子之间的差异来分离的。1-凝胶色谱法相对分『质ht较小的蛋白质相对分了质凰较人的蛋白质凝胶颗粒A00600B(1)分离蛋白质的过程(如图B)①蛋白质混合物上柱。②洗脱开始,相对分子质量狡尘的蛋白质扩散

6、进入凝胶颗粒内；相对分子质量较大的蛋白质则被排阻于凝胶颗粒之外。③相对分子质量较尘的蛋白质被滞留；相对分子质量较左的蛋白质向下移动。④相对分子质量个同的分子完全分开。⑤相对分子质量较大的蛋白质已从层析柱中洗脱出来，相对分子质量较小的蛋白质还在行进中。(2)凝胶色谱法的原理相对分子质量大相对分子质量小直径大小较大较小运动方式垂直向下运动无规则的扩散运动运动路程较短较长运动速度较快较慢洗脱次序先流出后流出2.缓冲溶液(1)概念：在一定范围内，能够抵制外界的酸缠对溶液pH的影响，维持pH基本不变的溶液。(2)缓冲溶液的配制：缓冲溶液通常由1〜2种缓冲剂溶解于水屮配制而成。调节缓

7、冲剂的使用比例就可以制得在不同田范围内使用的缓冲液。3.电泳(1)概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。(2)原理：在同一电场下，由于各种分子带电性质的差异以及分子本身人小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。(3)常用方法①琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖本身不带电荷，由于各种分子带电性质、分子大小和形状的不同，在电场屮迁移速率不同，从而得以分离。②聚丙烯酰胺凝胶电泳a.SDS：使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链；b.SDS能与各种蛋白质结合形成蛋白质一SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大