人教版高中生物选修1专题5课题3血红蛋白的提取和分离学案学生版

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1、选修1专题5课题3血红蛋白的提取和分离（学案）【学习目标】a.说出从血液中初步获取血红蛋白的原理和方法。b.说明凝胶色谱法的原理和方法。c.说出电泳的基本原理和方法。【知识点梳理】一、基础知识（一）血红蛋白提取与分离的依据1.2・3.4.5.（二）方法及原理凝胶色谱法：根据的大小分离蛋白质电泳法：根据的差异以及分子的不同分离蛋白质1.凝胶色谱法（1）材料：（2）原理：步骤：混合物上柱一洗脱一流动快、流动慢一收集大分子一收集小分子原理：当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路稈较长，移动速度:相对分。子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只

2、能在凝胶外部移动,路程较短，移动速度-相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。3.电泳法（1）概念：指带电粒子在作用下发生迁移的过程。（2）原理：分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的,从而实现样品中各种分子的分离。琼脂糖凝胶电泳法：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子在电场中迁移速度决定于所带电荷性质的—的不同。聚丙烯酰胺凝胶电泳法：在凝胶中加入SDS,使蛋白质解聚成单链，与各种蛋白质形成蛋白质一SDS复合物,使其迁移速度完全取决于o二、实验操作（一）样品处理（1）红细胞的洗涤：①目的：o②为防止血液凝固，应先加入柠檬酸钠。③所用洗涤液：是五倍体

3、积的（质量分数为0.9%的NoCl溶液）。④缓慢搅拌，采用低速短时间离心。⑤洗涤干净的标准是o（2）血红蛋白的释放：在的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。（3）分离血红蛋白溶液：（方法）离心。试管屮的溶液分为4层，从上往下依次是：①无色透明的o②白色薄层固体：沉淀层。③红色透明液体：溶液层。④喑红色沉淀层：沉淀。（4）透析：①方法：取5L血红蛋白溶液装入透析袋，将透析袋放入盛有300mL物质的量浓度为20mmol/L（pH为7）中，透析12h。②目的：去除样品中的杂质。③原理：透析袋能使自由进出，而将大分子物质保留在袋内。（二）凝胶色谱操作1.凝胶色谱柱的制作打孔一挖穴一安管一覆网一

4、纱包一插管。2.凝胶色谱柱的装填①材料：实验所用凝胶是交o②力法：凝胶用蒸憎水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，一次性缓慢倒入色谱柱内。不能有—存在。。然后用300mL物质的量浓度为20mmol/L充分洗涤平衡12h,使凝胶装填紧密。3.样品的加入和洗脱使吸管管口沿管壁将样品缓慢加入内，不要破坏凝胶面。待红色的蛋白质接近色谱柱低端时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。【课前热身】1.从细胞中提取某种特定的蛋白质比提取DNA难度大，其原因不是（）A.蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件更敏感，更易失活B.蛋白质的空间结构多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有统一的方法C.提取某种

5、特定的蛋白质需据其特性摸索提取的程序D.提取血红蛋白程序可分为样品处理、粗分离、纯化、纯度的鉴定四大步1.下列操作正确的是（）A.分离红细胞时采用低速长时间离心B.红细胞释放出血红蛋白只需耍加入蒸憎水就可C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D.透析时要用20mmol/L的磷酸缓冲液,透析12h2.下列关于电泳的说法中，正确的是（）A.电泳是指不带电的分子在电场的作用下发生迁移的过程B.电泳的过程要在一定的pH下，所以一定要使用缓冲液C.衙聚糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种常用的电泳方法D.聚丙烯酰胺凝胶电泳中，溶液中加入十二烷基硫酸钠（SDS）,电泳的迁移率主要取决于分子所帯电荷的

6、多少和相对分子质量的大小3.下列有关蛋白质提取和分离的说法，错误的是（）A.透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性B.采用透析法使蛋白质与其他小分子化合物分离开來C.离心沉降法通过控制离心速率使分子大小、密度不同的蛋白质分离D.蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷电性相同的电极方向移动