利用分子印迹技术从中药粗提物中定向分离胡黄连苷ⅱ探究

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1、利用分子印迹技术从中药粗提物中定向分离胡黄连昔II探究［摘要］胡黄连昔II为神经保护的中药活性成分，但其传统的分离工艺较复杂，效率较低，溶剂用量大，环境不友好，而分子印迹技术是一门分子识别技术，其制备的分子印迹聚合物因具有特异性结合位点而对目标分子有较高的选择吸附性，能够克服传统分离技术的以上缺点。该研究以胡黄连昔II为模板，采用沉淀聚合法制备了胡黄连昔II的分子印迹聚合物，并对其性能进行了研究。结果表明合成的聚合物微球不仅表面光滑，大小均匀，而且Scatchard分析得出胡黄连昔II分子印迹聚合物的最大表观结合位点数Q

2、max3.02mg•g-1,远远高于其空白印迹聚合物。充分证明利用沉淀聚合法可以合成形貌和靶向吸附能力均较好的黄连昔II分子印迹聚合物，可用于从中药粗提物中靶向分离胡黄连昔II及其结构类似物，有利于减少中药提取分离过程中有机溶剂的使用，环境友好，且操作简便，为中药胡黄连昔II的高效分离提供了新的方法。［关键词］胡黄连昔II;分子印迹技术；沉淀聚合法胡黄连昔II(picrosideII)是玄参科植物胡黄连的主要成分，具有促进神经干细胞增殖的功能。目前胡黄连昔II的提取分离通常采用溶剂提取法、水蒸汽蒸憎法和大孔树脂吸附法等传

3、统方法，但这些方法工艺复杂、试剂消耗大、环境不友好，因此寻找新的方法从中药粗提物中快速高效地分离出胡黄连昔II及其结构类似物具有重要的意义。分子印迹聚合物（molecularlyimprintedpolymers,MIPs）是1种对目标分子具有特异性识别和结合能力的聚合物，诺贝尔奖获得者PaulingEl］首先提出了可利用抗原作为模板来铸造抗体的空间结合位点理论，Dickey［2］首先实现了染料在硅胶中的印迹并提出"分子印迹”的概念。本文采用沉淀聚合法合成了以胡黄连昔II为模板分子的MIPs,研究表明其对目标分子具有较高

4、的选择吸附性，且此方法克服了传统分离方法的缺点，为中药有效成分及其类似物的提取分离提供了更加高效的方法。1材料UV-2550型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司），FEIQuanta200F扫描电子显微镜（美国FEI公司），KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器系统有限公司），HH-2型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），ZYQ-211型恒温振荡器（黑龙江东拓仪器制造有限公司），DMM-90904电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。胡黄连昔II对照品（98%,20111220）,购自江苏泽朗医药科技有限

5、公司；丙烯酰胺（AM）,均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；1-乙烯基咪哇（1-Vinyl）和乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)均为分析纯，购于日本东京化成工业株式会社(TCI)；偶氮二异丁騰(AIBN)化学纯，购自上海试四赫维生化有限公司；乙騰为色谱纯，甲醇、冰醋酸及其他试剂均为分析纯，均购自上海星可生化有限公司。2方法与结果2.1功能单体的选择称取胡黄连昔II对照品，溶于50%乙月青中，配成1.95X10-2mmol・L-1的溶液；再取适量的功能单体(1-Vinyl)于量瓶中，加入乙睛溶解，配成5.85X10-2

6、mmol・L-1的溶液。按照胡黄连昔II与功能单体的摩尔比为1：1〜1：6的顺序，逐次向胡黄连昔II标准液中加入功能单体溶液，并测定其紫外光谱的变化，见图1。胡黄连昔II溶于50%乙睛后，在200,220,260nm处有吸收峰，但随着功能单体的加入，只有200,220nm处的吸收峰有变化。随着AM的加入，200,220nm处的吸收峰都发生了明显蓝移，加入1-Vinyl3nm,效果更好，符合功能单体选择标准，故本实验选择1-Vinyl作为胡黄连昔II的功能单体。2.2MIPs的制备胡黄连昔II、功能单体1-Vinyl.交联

7、剂EDMA以1：5：12的摩尔比例加入盛有150mL90%甲醇的圆底烧瓶中，超声溶解；加入引发剂AIBNIOmg,溶解后,通氮气15min,密封，60£水浴聚合24h；反应合成的聚合物经干燥后，用甲醇-冰醋酸(9：1)以索氏提取的方式进行洗脱，洗去模板分子以及未聚合的功能单体和交联剂，直至紫外检测无以上物质的紫外吸收；再用甲醇洗去残留的冰醋酸，即得到胡黄连昔II的分子印迹聚合物，经60°C真空干燥，备用。空白印迹聚合物（NIPs）的合成除了不加模板分子胡黄连昔II外，其余步骤同于MIPs的制备[3-4]o2.3形貌表征取

8、适量胡黄连昔IlMIPs于扫描电子显微镜下观测拍照，外形和大小符合标准，见图2O从图中可以看出采用沉淀聚合法合成的胡黄连昔IIMIPs均呈现较为光滑的球状，大部分微球大小较为均匀，且分散性较好，只有小部分产生粘连。所以，利用沉淀聚合法能够合成形貌较好的胡黄连昔IIMIPs微球。2.4静态吸附实验将上述实验合成的胡黄连