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《可可毛色二孢菌对白木香产生倍半萜诱导作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、可可毛色二砲菌对白木香产生倍半菇诱导作用［摘要］为了明确可可毛色二胞菌Lasiodiplodiatheobromae对白木香产生倍半菇的诱导作用。采用气质联用(GC-MS)对可可毛色二胞菌PDA发酵液进行检测，发酵液中检测到茉莉酸类化合物(jasmonates,JAs)。利用固相微萃取-气质联用(SPME-GC-MS)检测发酵液处理后白木香愈伤中沉香倍半菇成分，发现其能够诱导白木香愈伤产生a-愈创木烯(a-guaiene),§-愈创木烯(§-guaiene),a-蛇麻烯(a-humulene)3种沉香倍半菇。推测可可毛色二胞菌可产生茉莉酸类
2、物质，其作为伤害信号分子诱导白木香产生倍半菇。［关键词］可可毛色二砲菌；茉莉酸类物质；白木香；倍半菇［收稿日期］2013-07-16［基金项目］国家自然科学基金项目(31000136,81173481)；北京市自然科学基金项目(6102024)；教育部新世纪优秀人才支持计划项目(2008)；高等学校博士学科点专项科研基金项目(20091106120009)；“十二五”国家科技支撑计划项目(2011BAI01B07)；海南省中药现代化专项项目(2010ZY001,2012ZY002)；海南省重大科技研发专项(ZDZX20100006)［通信作
3、者］*张争，Tel:(010)57833363,E-mail：zhangzheng321@126.com；*李秀锦，教授，Tel:(0335)8061569,E-mail：lixiujin9824@aliyun.com［作者简介］韩晓敏,Tel:(010)57833363,E-mail：hanxiaomini98817@sina・com白木香Aquilariasinensis(Lour・)Gilg又称土沉香，属瑞香科沉香属植物，为我国特有的热带及亚热带常绿乔木，是我国生产名贵芳香类药材沉香的唯一法定植物来源［1］。沉香是我国、日本、印度以及
4、其他东南亚国家的传统名贵药材和名贵的天然香料，其味辛、苦，性微温，能行气止痛、温中止呕、纳气平喘［2］。白木香只有受到真菌侵染等伤害才产生沉香。华南植物研究所从沉香样品中分离到黄绿墨耳菌Menanotusflavolives并证实该菌可加速白木香结香进程［3-4］。本实验室首次分离到白木香枝枯病菌可可毛色二胞菌Lasiodiplodiatheobromae,并证实其可以诱导白木香产生沉香倍半菇等物质［5］,但其机制尚不明确。Michiho等将植物伤害信号分子茉莉酸甲酯(MeJA)加入至白木香悬浮细胞中诱导产生了沉香倍半菇a-愈创木烯、a-蛇
5、麻烯和6-愈创木烯［6］。有研究报道称可可毛色二砲菌可产生植物伤害信号分子JAs并导致植物程序性死亡［7-9］o本实验将验证分离的可可毛色二胞菌能否产生JAs,及其能否诱导白木香产生上述3种倍半菇，以期深入揭示真菌诱导白木香产生沉香的机制。1材料可可毛色二砲菌L.theobromae（GenbankNo.JQ782210.1）是本实验室从白木香枝枯病枝中成功分离。乙酸乙酯（AR,国药集团化学试剂），茉莉酸甲酯（Sigma,美国），三甲基硅烷基重氮甲烷（Sigma,美国）。气相色谱仪A^lent7890A,气质联用仪Varian450GC-3
6、00MS,旋转蒸发仪（Buchi,瑞士），萃取头（Supecl,PDMS/DVB/CAR,美国）及萃取瓶（Supecl,7mL,美国）。2方法2.1可可毛色二鞄菌发酵液中JAs的萃取及甲酯化将实验室保存的可可毛色二胞转接到PDA培养基，活化培养5d。将活化培养基打成菌饼，置于PD培养液中，30°C,150r•min-1黑暗培养7d[9]o4°C,5000r•min-1将可可毛色二胞菌发酵液离心20min,取上清液用6mol•L-lHC1调pH至3.0后用等量乙酸乙酯萃取3次，取上层液合并。将萃取液按400：1减压浓缩。向1mL浓缩液中于通风
7、橱中加入10滴三甲基硅烷基重氮甲烷，甲酯化30min后置于-20£冰箱密闭保存，备用。2.2GC-MS检测茉莉酸甲酯将甲酯化后的JAs与茉莉酸甲酯对照按如下色谱质谱条件进行GC-MS分析。气相色谱条件：石英毛细管柱VF-5MS,0.25mmX60m,膜厚0.25umo升温程序：从50°C开始以10°C-min-1升到155°C,保留15min；再以8°C-min-1升到280°C,保留10min。载气为He,柱流量1mL•min-1,进样量1PLo进样口温度为250°C,不分流。质谱条件EI源；电离电压70eV；离子源温度250°C；全扫描
8、范围50〜500amu。2.3甲酯化后茉莉酸甲酯的含量测定茉莉酸甲酯对照品4.78mg,溶于2mL乙酸乙酯中进行梯度稀释，按上述条件进样，以浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y
