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1、TR注射液对血小板聚集影响体外探究【摘要】目的：TR注射液为具有消除氧自由基作用的脑神经保护剂。本试验采用5种血小板聚集诱导剂，测定TR注射液体外对兔血小板聚集的影响，为其进一步开发和临床应用提供参考依据。方法：采用体外血小板聚集试验，观察TR注射液对五种血小板聚集诱导剂二磷酸腺昔（ADP）、血小板活化因子（PAF）、花生四烯酸钠盐（AA）、凝血酶（T）和胶原诱导的兔血小板聚集的影响。采用ADP、PAF、AA和T作为聚集剂，TR终浓度分别为396、198和99?g/mlo采用胶原作为聚集剂，TR终浓度分别为198、99、49.5.24.8和12.4?g/mloADP、PAF、AA和胶原聚集
2、剂阳性对照选用维拉帕米。凝血酶聚集剂的阳性对照选用肝素钠。结果：TR终浓度高达396?g/ml对凝血酶诱导的血小板聚集完全没有影响。终浓度198?g/ml对ADP、PAF和AA诱导的血小板聚集没有抑制作用。对胶原诱导的血小板聚集,TR终浓度在49.5?g/ml不产生抑制作用。结论：TR注射液对五种血小板聚集诱导剂诱导的兔血小板聚集无抑制作用。【关键词】TR注射液；血小板聚集【中图分类号】R284【文献标识码】A【文章编号】1004-7484（2012）13-0144-02TR注射液为具有消除氧自由基作用的脑神经保护剂，临床拟用于治疗中风。它以已上市的脑神经保护药依达拉奉（Edaravone
3、）作为先导化合物，运用me-too/mebetter新药开发策略，基于依达拉奉结构进行合理药物设计，设计目的在于提高此类化合物消除氧自由基能力。经合成和体内外药效筛选发现新衍生物TR,其化学名2-甲基-5-亚胺-5H-苯并［d］毗哇［5,1-b］［1,3］❷嗪，有希望开发成为具有自主知识产权，疗效突出，不良反应低的新一代脑神经保护药。本实验采用体外血小板聚集试验，观察TR注射液对五种血小板聚集诱导剂二磷酸腺昔（ADP）、血小板活化因子（PAF）、花生四烯酸钠盐（AA）、凝血酶（T）和胶原诱导的兔血小板聚集的影响，为其进一步开发和临床应用提供参考依据。1材料与方法1.1药品及试剂TR注射液，
4、由南京中瑞药业有限公司提供；批号：100802；规格：150ml（250ml输液瓶装）；含量：19.8mg/ml；性状：淡黄色澄明液体；保存条件：室温避光；配制方法：试验前用TR空白对照液稀释配制。TR空白对照液，由南京中瑞药业有限公司提供；批号：100801；规格：300ml（500ml输液瓶装）；性状：无色澄明液体；保存条件：室温避光。腺嗥吟核昔二磷酸单钠盐（ADP）,上海华舜生物工程有限公司，进口分装，批号：Ameresco0160o将ADP用生理盐水配成lOOmM母液,实验前用生理盐水稀释成0.5mM,取7?1加入总量350?1富血小板血浆(PRP)中，终浓度为lOuMo血小板活化
5、因子(PAF)：Sigma产品，批号17K1566。临用前用生理盐水配制成10?g/ml,取7?1加入总量350?1富血小板血浆(PRP)中，终浓度为0.2?g/mlo花生四烯酸钠盐(AA),Sigma产品，批号098K5204。临用前用生理盐水配制成5mg/ml,取7?1加入总量350?1富血小板血浆(PRP)中，终浓度为100?g/mlo凝血酶(T),Sigma产品,批号105K7700。临用前用生理盐水配制成67U/ml,取7?1加入总量350?1富血小板血浆(PRP)中,终浓度为1.34U/mlo胶原(Collagen,Col),自制。取大鼠腹部皮肤，去毛、皮下脂肪，生理盐水冲洗皮
6、肤后吸去多余水分，剪碎皮肤，加生理盐水，玻璃匀浆器匀浆，3000r•min-1离心lOmin,取上清。保存4工备用。取20?1加入总量350?1富血小板血浆(PRP)中，终浓度为20mg/mlo肝素钠注射液，规格2ml:12500U,批号100729,常州千红生化制药股份有限公司产品。临用前配制成1.25U/ml,取7?1加入总量350?1富血小板血浆(PRP)中，终浓度为0.025U/mlo维拉帕米注射液，规格2ml：5mg,批号090901,上海禾丰制药有限公司。实验时取原液7?1加入总量350?1富血小板血浆（PRP）中，终浓度为50mg/mlo柠檬酸三钠，批号F20100330,国
7、药集团化学试剂有限公司。水合氯醛，批号20091113,国药集团化学试剂有限公司。生理盐水，即氯化钠注射液，规格500ml：4.5g,批号09121003,扬州中宝制药有限公司。1.2仪器设备低速自动平衡离心机，型号LD25-2,北京医用离心机厂。血小板聚集仪，型号540VS,美国CHR0N0L0G公司。1.3动物白色家兔，体重2.0-3.0kg雄性，由南京市江宁青龙山动物繁殖场提供，动物合格证号：SCXK（苏）2007
