油茶产黄酮内生真菌的发酵工艺优化

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1、油茶产黄酮内生真菌的发酵工艺优化　　摘要在单因素试验的基础上，采用正交试验法对油茶产黄酮内生真菌的发酵条件进行研究，结果表明，油茶产黄酮内生真菌Y-UH-2的最适发酵条件为：培养基起始pH值为7，接种量为5%，培养温度为28℃，转速170r/min，其黄酮产量为3.18mg/100mL，比未优化时高出42%。　　关键词黄酮产量；油茶；植物内生菌；单因素优化；正交优化　　中图分类号S794.4文献标识码A文章编号1007-5739（2016）20-0260-02　　OptimizationofFermentationConditionsofFlavonoids-producingSt

2、rainofCamelliaoleifera　　ZHANGTing　　（CollegeofBioengineering，JingchuUniversityofTechnology，JingmenHubei448000）　　AbstractThefermentationconditionsofflavonoidsproducingstrainofCemelliaoleiferawerestudiedusingorthogonaltest，basedonthesinglefactorexperments.Theresultsshowedthattheoptimumfactorswere

3、asfollow：theoptimalintialpHvaluewas7，inoculationamountwas5%，theculturetemperaturewas28℃，fermentationspeedwas170r/min.Theflavonoidsyieldwas3.18mg/100mL，improvedby42%，comparedwiththeoriginalstateofstrain6Y-UH-2.　　Keywordsflavonoidsyield；Camelliaoleifera；endophyte；singlefactorexperments；theorthog

4、onaltest　　植物内生真菌是指在一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌，普遍存在于植物中[1]。由于内生真菌长期存在于宿主植物中，与宿主植物共同进化，能产生与宿主植物类似的活性物质，目前已成为生物防治中有潜力的微生物农药、增产菌或作为潜在的生防载体菌而加以利用[2]。油茶（Camelliaoleifera），别名茶油树、茶子树、白花茶，常绿小乔木。油茶是我国独有的一种食用油料木本植物。茶油色清味香，营养丰富，且耐贮藏，是优质的食用油。另外，也可作为润滑油、防锈油用于工业。茶油中含有的不饱和脂肪酸高达90%，远高于菜油、花生油和豆油，与橄榄油相比VE含量高1倍，

5、并且含有山茶甙等特定生理活性物质，具有相当高的营养价值。茶壳还是一种很好的食用菌培养基[3]。研究发现，油茶叶中含有多种黄酮类化合物，对这些黄酮类的获得方式主要依赖于提取[4]。本研究对前期获得的油茶产黄酮内生真菌的诱变菌株Y-UH-2进行发酵工艺优化，希望能为今后的工业化生产奠定基础。　　1材料与方法　　1.1材料与试剂　　1.1.1菌株。以油茶产黄酮内生真菌菌株的诱变菌株Y-UH-2为试验菌株。　　1.1.2培养基。采用PDA培养基[5]，培养基配制完毕后，高压灭菌锅121℃，20min。6　　1.1.3试剂。芦丁标准样品购自荆州昌华试剂公司，葡萄糖、琼脂、蛋白胨、磷酸二氢钾、

6、磷酸氢二钾、硫酸镁、蔗糖、氯化钠、硝酸铵、硝酸钠、氯化钾、硫酸亚铁、乙酸乙酯等均为分析纯，购自武汉科普化学试剂有限公司。　　1.2仪器与设备　　SHZ-3循环水多用真空泵：上海沪西分析仪器厂有限公司；JJ-CJ-2FD型双人单面净化工作台：苏州金净净化设备科技有限公司；722s可见分光光度计：上海仪电分析仪器有限公司；DHWY-200B恒温培养振荡器：上海智城分析仪器制造有限公司；DH-600A电热恒温培养箱：北京科伟永兴仪器有限公司；100S-11高压灭菌锅：上海博讯实业有限公司医疗设备厂。　　1.3试验方法　　1.3.1发酵单因素优化试验。参照冷桂华等[6-8]的研究文献选取培

7、养温度、培养基起始pH值、转速和接种量这4种单因素水平，如表1所示。　　1.3.2正交试验。结合单因素优化结果，选取4个单因素的各3个水平，如表2所示，用L9（34）进行正交试验设计。　　1.3.3黄酮含量的测定。按照沈建福等[9]的方法，测定一系列浓度不同的芦丁标准液的吸光值，绘制芦丁标准曲线。再根据芦丁标准曲线计算出黄酮含量。　　2结果与分析　　2.1单因素试验结果　　2.1.16培养温度对发酵结果的影响。培养温度对发酵条件的影响如图1所示，温度会影响菌株的生长繁