正交设计法优化厚朴七物颗粒剂的提取工艺

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1、正交设计法优化厚朴七物颗粒剂的提取工艺　　摘要：目的：采用正交设计优化厚朴七物颗粒剂的水提取工艺。方法：正交法考察加水倍数、煎煮时间、煎煮次数三因素对水提取工艺的影响。HPLC法对有效成分厚朴酚与和厚朴酚进行含量测定。结果：10倍加水量，1h的煎煮时间，煎煮2次为最佳提取工艺。HPLC法含量测定：厚朴酚与和厚朴酚回归方程分别为Y=6856X-372.5，r=0.9999，线性范围1.057-6.342μg、Y=6427X+583.6，r=0.9999，线性范围0.728-4.368μg。检查项中阴性对照、稳

2、定性、精密性等试验均符合试验标准。结论：优化的提取工艺高效稳定。　　关键词：厚朴七物颗粒剂；正交设计；高效液相色谱法　　厚朴七物汤出自东汉医学名家张仲景的《金匮要略》[1]。应用于胃肠炎、肠梗阻、肠痉挛、食积发热、发热腹痛、老年习惯性便秘等病症，疗效显著。目前，在临床上仍沿用其传统的汤剂剂型，尚无关于厚朴七物汤中药制剂的相关文献报道，给患者的使用带来极大不便。本课题采用正交试验考察了加水倍数、煎煮时间和煎煮次数对厚朴七物颗粒剂提取工艺的影响，为“厚朴七物汤”的颗粒制剂在临床上更广泛的应用提供理论支持。　　1

3、.材料与方法　　1.1仪器　　十万分之一电子天平（BP211D型）Sartorius；Waters6600高效液相色谱系统（美国）；Waters2996二极管阵列检测器；Waters717plus自动进样器（含48位及96位进样盘）；超声波清洗仪（SB3200型）上海Branson；C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）大连伊力特。　　1.2试剂与药材　　厚朴酚对照品与和厚朴酚对照品（购于中国药品生物制品检定所）、甲醇（色谱纯）、超纯水、甲苯一甲醇（17：1）。本课题中使用的厚朴、枳实、桂枝、大黄、

4、甘草等中药材均购于哈尔滨北京同仁堂分店。　　2.方法与结果　　2.1含量测定方法建立　　2.1.1溶液的配制　　对照品溶液制备：精密称取厚朴酚与和厚朴酚的对照品4.228mg、2.9142mg，置于10mL的容量瓶中，加甲醇适量溶解后稀释至刻度，充分摇匀即得1mL含厚朴酚0.4228mg与和厚朴酚0.2914mg的对照品溶液。　　供试品溶液的制备：精密称取恒重干燥提取物3.000g，置于锥形瓶中加甲醇25mL，称重，密塞后超声处理30min，冷却后加甲醇至原始重量，摇匀后滤过即得。　　阴性样品溶液的制备：处

5、方中除去厚朴后的各种药材，采用与供试品同样的制备工艺，制备出不含有厚朴的阴性样品溶液。　　2.1.2色谱条件[2]　　C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相甲醇-水（78：22），流速1.0mL/min，检测波长294nm，柱温25℃，进样量5μL。　　2.1.3标准曲线的绘制6　　精密量取含厚朴酚与和厚朴酚的对照品混合液2.5μL、5.0μL、7.5μL、10μL、12.5μL、15μL。依次注入高效液相色谱仪中，对每次样品进行检测，求出峰面积并对结果进项线性分析，考察其线性关系。求得回归

6、方程：厚朴酚，Y=6856C-372.5，r=0.9999，线性范围1.057-6.342μg；和厚朴酚Y=6427C+583.6，r=0.9999，线性范围0.728-4.368μg。　　2.1.4精密度试验　　取上述含有厚朴酚与和厚朴酚的混合对照品溶液5μL，重复进样6次，对峰面积A进行偏差分析。得厚朴酚的峰面积RSD为1.04%，和厚朴酚的峰面积RSD为1.07%。说明仪器精密度良好。　　2.1.5稳定性试验　　取配制好的供试品溶液，密封后在室温保存，考察时间分别为0，12，24，36，48，60h的

7、含量，对实验结果进行偏差分析。结果显示，RSD值为0.5401%，表明此含量测定方法的稳定性良好，60h之内可以保证样品稳定。　　2.1.6回收率试验　　取供试品溶液6份（其厚朴酚浓度为0.844mg/mL）。并配置厚朴酚对照品浓度同样为0.844mg/mL的溶液，精密量取上述两种溶液各2.5μL，加入50mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，分别进样并分析所测量结果。显示，本方法加样回收率为99.5%，且RSD值为1.034%，在偏差允许范围内，准确性较高。　　2.2提取工艺的考察6　　2.2.1处方的确定　　原处

8、方根据汉代度量衡与现代单位之间的换算之后，厚朴七物汤处方为：厚朴24g，甘草9g，大黄9g，大枣20g，枳实5g，桂枝6g，生姜15g。　　2.2.2提取方法与因素水平的确定　　按处方称取9份，分别浸泡40min后，按正交设计进行煎煮，并分别将煎煮液过滤后浓缩至相对密度为1.08-1.15（80℃），放冷至40℃时加入乙醇至含醇量为75%，冷藏24h后过滤，滤液回收乙醇后真空干燥至恒重。通过测定厚朴酚和和厚朴酚的