一种烟草细菌性病害病原菌分离培养及致病性测定

《一种烟草细菌性病害病原菌分离培养及致病性测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、一种烟草细菌性病害病原菌分离培养及致病性测定　　摘要：从贵州六盘水烟区采集感病烟株，采用组织分离法进行病原菌分离纯化，并将培养条件进行优化，以南江3号烟草品种为试材，进行病原菌致病性测定。结果表明，该菌培养最适NaCl浓度4%，葡萄糖浓度10%，pH值5～7，培养温度25～30℃，最佳侵染温度20～25℃，相对湿度70%以上，该病害应属于中温高湿侵染病害。　　关键词：烟草；病原菌；分离培养；致病性　　中图分类号：S435.72文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）11-0072-04　　AbstractTheisolationandpurificationo

2、fpathogenofatobaccobacterialdiseasewasconductedfromtobacco-growingareasinLiupanshuiofGuizhouProvinceusingtheissueseparationmethod.Itscultureconditionswereoptimized，andthepathogenicitywasmeasuredwithJiangnan3asmaterial.Theresultsshowedthattheoptimumgrowthconditionsofthispathogenwere4%ofsalt

3、concentration，10%ofsugarconcentration，5to7ofpHvalue，and25～30℃ofcultivationtemperature.Andthebestinfestingconditionsofthispathogenwere20～25℃ofinfestingtemperature，andmorethan70%ofrelativehumidity.Thus，thediseasewaseasytoinfectionundermiddletemperatureandhigh8humidityconditions.　　KeywordsTob

4、acco；Pathogen；Isolationandculture；Pathogenicity　　烟草作为我国重要的经济作物，其产业的良好发展得到广泛关注[1]。而烟草细菌性病害是威胁烟草生产的主要病害之一，其发生普遍且危害严重，严重影响着烟草的质量和产量，进而导致经济效益极大受损。已经报道的细菌性病害有青枯病、细菌性角斑病、野火病、空茎病、细菌性黑杆病等[2-8]。余磊等于2004年报道了云南文山州西畴县和保山市昌宁县发现1种由细菌铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）侵染引起的烟草新病害[1]。2007年，笔者在贵州省盘县烟区忠义、保田发现一种烟草未

5、知病害，该病害在忠义乡开始零星发生，主要为害烟株中下部叶片叶柄，造成叶片呈水浸状腐烂，发病严重时，烟株中下部茎秆与叶柄连接处开始出现水浸状斑点，最后呈溃疡状腐烂，2009年发生面积达60多公顷，重病田块病株率达100%，严重田块造成绝收，2010年发生面积增大，有逐渐蔓延趋势，严重制约着该地区烤烟生产。本试验对该病的病原菌进行培养条件优化及致病性测定，以明确其生物学特性，为病害防治提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1供试烟草品种从盘县忠义发病烟田采回发病烟叶及茎秆（品种：南江3号），室内接种鉴定品种南江3号。　　1.1.2主要试剂牛肉膏（北京奥博星生物

6、科技有限责任公司）；8蛋白胨（北京双旋微生物培养基制品厂）；琼脂（福建莆田市联邦琼脂有限公司）；NaCl（重庆川江化学试剂厂）。　　1.1.3培养基配方NA培养基：牛肉膏3.0g，NaCl5.0g，蛋白胨10.0g，琼脂20.0g，pH6.8～7.0，加水定容到1000mL，121℃湿热灭菌20min。　　JNFb培养基：DL-苹果酸5g?L-1、K2HPO40.6g?L-1，KH2PO41.8g?L-1，MgSO4?7H2O0.2g?L-1，NaCl0.1g?L-1，CaCl2?H2O0.2g?L-1，FeEDTA0.066g?L-1，溴香酚蓝指示剂2mL，微量元素2mL

7、，KOH4.5g?L-1，pH5.8，固体培养基加入琼脂17g。微量元素成分如下：Na2MoO4?2H2O0.2g，MnSO4?H2O0.235g，H3BO30.28g，CuSO4?5H2O0.008g，ZnSO4?7H2O0.024g，溶于200mL蒸馏水中。　　1.2病原菌的分离纯化　　病原菌分离参照伯杰氏细菌手册[9]及饶小丽试验方法[10]。将病株茎秆表面用清水洗净晾干，再用85%酒精擦拭，迅速过火烧尽酒精，用消过毒的解剖刀刮去表面皮层，刮其褐色组织，置于无菌培养皿中，滴入2滴无菌水，用无菌玻棒捣碎组织，静