一种烟草细菌性病害病原菌分离培养及致病性测定

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1、一种烟草细菌性病害病原菌分离培养及致病性测定  摘要:从贵州六盘水烟区采集感病烟株,采用组织分离法进行病原菌分离纯化,并将培养条件进行优化,以南江3号烟草品种为试材,进行病原菌致病性测定。结果表明,该菌培养最适NaCl浓度4%,葡萄糖浓度10%,pH值5~7,培养温度25~30℃,最佳侵染温度20~25℃,相对湿度70%以上,该病害应属于中温高湿侵染病害。  关键词:烟草;病原菌;分离培养;致病性  中图分类号:S435.72文献标识号:A文章编号:1001-4942(2016)11-0072-04  AbstractTheisolationandpurificationo

2、fpathogenofatobaccobacterialdiseasewasconductedfromtobacco-growingareasinLiupanshuiofGuizhouProvinceusingtheissueseparationmethod.Itscultureconditionswereoptimized,andthepathogenicitywasmeasuredwithJiangnan3asmaterial.Theresultsshowedthattheoptimumgrowthconditionsofthispathogenwere4%ofsalt

3、concentration,10%ofsugarconcentration,5to7ofpHvalue,and25~30℃ofcultivationtemperature.Andthebestinfestingconditionsofthispathogenwere20~25℃ofinfestingtemperature,andmorethan70%ofrelativehumidity.Thus,thediseasewaseasytoinfectionundermiddletemperatureandhigh8humidityconditions.  KeywordsTob

4、acco;Pathogen;Isolationandculture;Pathogenicity  烟草作为我国重要的经济作物,其产业的良好发展得到广泛关注[1]。而烟草细菌性病害是威胁烟草生产的主要病害之一,其发生普遍且危害严重,严重影响着烟草的质量和产量,进而导致经济效益极大受损。已经报道的细菌性病害有青枯病、细菌性角斑病、野火病、空茎病、细菌性黑杆病等[2-8]。余磊等于2004年报道了云南文山州西畴县和保山市昌宁县发现1种由细菌铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)侵染引起的烟草新病害[1]。2007年,笔者在贵州省盘县烟区忠义、保田发现一种烟草未

5、知病害,该病害在忠义乡开始零星发生,主要为害烟株中下部叶片叶柄,造成叶片呈水浸状腐烂,发病严重时,烟株中下部茎秆与叶柄连接处开始出现水浸状斑点,最后呈溃疡状腐烂,2009年发生面积达60多公顷,重病田块病株率达100%,严重田块造成绝收,2010年发生面积增大,有逐渐蔓延趋势,严重制约着该地区烤烟生产。本试验对该病的病原菌进行培养条件优化及致病性测定,以明确其生物学特性,为病害防治提供理论依据。  1材料与方法  1.1材料  1.1.1供试烟草品种从盘县忠义发病烟田采回发病烟叶及茎秆(品种:南江3号),室内接种鉴定品种南江3号。  1.1.2主要试剂牛肉膏(北京奥博星生物

6、科技有限责任公司);8蛋白胨(北京双旋微生物培养基制品厂);琼脂(福建莆田市联邦琼脂有限公司);NaCl(重庆川江化学试剂厂)。  1.1.3培养基配方NA培养基:牛肉膏3.0g,NaCl5.0g,蛋白胨10.0g,琼脂20.0g,pH6.8~7.0,加水定容到1000mL,121℃湿热灭菌20min。  JNFb培养基:DL-苹果酸5g?L-1、K2HPO40.6g?L-1,KH2PO41.8g?L-1,MgSO4?7H2O0.2g?L-1,NaCl0.1g?L-1,CaCl2?H2O0.2g?L-1,FeEDTA0.066g?L-1,溴香酚蓝指示剂2mL,微量元素2mL

7、,KOH4.5g?L-1,pH5.8,固体培养基加入琼脂17g。微量元素成分如下:Na2MoO4?2H2O0.2g,MnSO4?H2O0.235g,H3BO30.28g,CuSO4?5H2O0.008g,ZnSO4?7H2O0.024g,溶于200mL蒸馏水中。  1.2病原菌的分离纯化  病原菌分离参照伯杰氏细菌手册[9]及饶小丽试验方法[10]。将病株茎秆表面用清水洗净晾干,再用85%酒精擦拭,迅速过火烧尽酒精,用消过毒的解剖刀刮去表面皮层,刮其褐色组织,置于无菌培养皿中,滴入2滴无菌水,用无菌玻棒捣碎组织,静

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