梅毒螺旋体实验室检测技术概述

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1、梅毒螺旋体实验室检测技术概述【摘要】经过20多年的发展，梅毒检测技术有了较大发展，实验室采用的检测梅毒方法也随之不断更新变化。本文就VDRL、USR、RPR、TRUST、TPHA、TPPA、ELISA、金标法、FTA-ABS.WB、化学发光免疫分析法、PCR等梅毒的实验室检测方法的原理与优缺点做一个较全面的评述，藉此对各实验室选择适合的检测技术有所帮助。【关键词】梅毒螺旋体；血清学检测；化学发光；核酸检测梅毒是国家规定的血液筛查的项目之一，在乙肝、丙肝、艾滋三个项目已经开始采用核酸筛查血液时，梅毒检

2、测现阶段有哪些更好的方法可以用在血液筛查中提高血液筛查效果呢？最近20多年，随着科学技术的迅速发展，梅毒的检测方法与技术也取得了长足进步，不仅表现在检测试剂的灵敏度和特异性不断提高上，还表现在化学发光技术与核酸检测技术（NAT）的引入。笔者现就梅毒螺旋体的实验室检测技术做一评述。1使用类脂质抗原的梅毒螺旋体血清学检测技术[1]此类试验主要包括VDRL、USR、RPR、TRUST等，其中VDRL和USR需要使用显微镜观察结果,RPR和TRUST用肉眼观察结果。1.1VDRL（性病研究实验室试验）2

3、0世纪50、60年代最为常用的梅毒血清学试验。反应素（梅毒螺旋体破坏机体组织过程中，机体产生的相应抗体）与抗原（从牛心中提取的心磷脂和从鸡蛋黄中提取的卵磷脂及胆固醇等有效成分）发生反应，试验时的摇动，使得反应素与抗原反应，形成的颗粒互相粘附，形成显微镜下可见的凝集沉淀，即为阳性。VDRL试验有几个缺点，即抗原需要每日配置；血清标本需加热灭活；要在显微镜下观察结果。因此，后来又推出了改良的USR和RPR。1.2USR（不加热血清反应素试验）本方法对VDRL抗原进行了改良，即将VDRL抗原稀释后,再将抗

4、原悬液离心，然后在沉淀物中加入含有EDTA-Na2即氯化胆碱等的缓冲液。EDTA可使抗原半年内不变性，氯化胆碱可以灭活补体，这样就无需每天配置抗原，也无需血清加热灭活，但仍需显微镜下观察结果。1.3RPR（快速血浆反应素环状卡片试验）本方法是在USR抗原的基础上，加入特制的活性炭颗粒,这样，抗原抗体反应呈现出黑色的凝集颗粒，在白色纸片上,肉眼易于观察。1.4TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）本方法是在前述抗原试剂中加入了甲苯胺红。甲苯胺红是一种颗粒均匀的化学染料，阳性结果呈现出红色的凝集颗粒，更加

5、便于观察。目前，用于梅毒筛查的常用方法是TRUST和RPRo上述4种试验都使用类脂质抗原，采用凝集反应方法测定，操作简单快速，但4种方法的特异性较差。多种疾病如类风湿关节炎、红斑狼疮等，会出现生物学假阳性。有报道在没有梅毒感染史的正常人群中上述实验会有0.1%的阳性率oTRUST方法曾经用于血液筛查，但从2000年起逐渐停用，取而代之的是灵敏度和特异性更高的酶免方法。2使用密螺旋体抗原的梅毒螺旋体血清学检测技术此类试验是梅毒特异性抗体检测试验，比较常用的有如下几种。2.1TPHA（梅毒螺旋体血球凝集

6、试验）本实验是以梅毒螺旋体作为抗原的间接血细胞凝集试验。所用抗原为将梅毒螺旋体nichols株经超声裂解后得到的可溶性抗原成分，用其致敏火鸡或羊红细胞，然后用Reiter株（无毒株）制成的吸收剂稀释血清，吸收血清中的非特异性抗体。经过上述处理后TPHA试剂的特异性和敏感性均较高。本试验无需特殊设备，尚未实现自动化检测，试验中可发生自凝现象，需引起重视。由于TPHA试剂成本较高，且不能实现批量自动化检测，因此本方法暂不适合用于血液筛查。2.2TPPA（梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验）本实验原理与TPHA类

7、似，其所用凝集颗粒为明胶颗粒而非红细胞。TPPA在2002年为美国疾病预防控制中心推荐用作梅毒确证试验，其灵敏度和特异性均较髙，但试剂价格较贵。据文献报道，TPPA与ELISA检测结果之间符合性很好[2,3]o有报道称TPPA试验可以实现自动化检测[2],但未见TPPA试验自动化的明确报道。TPPA的自动化检测也是笔者科研立项的题目。如果TPPA可以实现自动化检测，那本方法是很适宜用作血液筛查的。应用TPPA作为血液筛查方法其意义不仅在于它是一项确认试验，还在于进行献血者告之时给予肯定的结果

8、，从而避免引起各种纠纷。2.3ELISA（酶联免疫吸附试验）本方法所用试剂经过十余年的发展，现采用基因工程的方法，得到高纯度的梅毒螺旋体外膜蛋白作为抗原，大大提高了试剂的特异性。用于检测TP的IgG和IgM抗体。大量的试验表明其与TPPA,TPHA有较好的相关性[2,3]。本试验操作简单，可实现自动化检测，是梅毒血清学诊断试验的首选方法。现阶段血液筛查要求使用两个不同厂家生产的试剂进行筛查，本方法应用已经十分成熟。2.4金标法本法是以基因工程生产重组纯化的TP外膜