武汉爱博泰克生物科技有限公司毕业实习报告

《武汉爱博泰克生物科技有限公司毕业实习报告》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、做自己喜欢做的工作，你会觉得每天都是开心的。——在爱博泰克实习阶段实习单位：武汉爱博泰克生物科技有限公司实习岗位：生产部克隆组实验员实习时间：2011年10月—2012年5月一、抗体行业的发展及未来前景19世纪末，白喉毒素的发现宣告第一代抗体诞生，随着现代免疫学、细胞生物学和分子生物学的不断发展，第二代抗体-单克隆抗体、第三代抗体－基因工程抗体分别于1975年和1984年问世。一个多世纪以来，抗体作为体内最奇妙的蛋白质分子，一直是生命科学，尤其是生物医学领域的研究热点，为人类多种疾病的预防、诊断和治疗做出了巨大贡献。早年人工制备抗体的方法主要是以相应抗原免疫动物，获得抗血清。由于抗原常常含有

2、多种不同的抗原表位，加之所获得的抗血清也未经免疫纯化，因此，获得的抗血清实际上是含多种抗体的混合物，即多克隆抗体(polyclonalantibody)。用于制备抗血清的动物也因抗体需求量的增加而从小鼠、大鼠、兔、羊到马等大动物。为了获得大量的、高特异性、均质的抗体，1975年，Kohler和Milstein建立了体外细胞融合技术，获得了免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，大规模地制备出高特异性的单克隆抗体(monoclonalantibody，简称单抗)。此后，单抗在理论和实践上的应用，成了解决生物学、医学等诸多重大问题的重要手段。然而其中仍有问题有待解决，例如在体内应用时，作为异

3、源蛋白的单抗会引起人抗小鼠抗体反应(humananti-mouseantibodyresponse，HAMA)。随着DNA操作和基因工程技术的发展，使得人们已有可能对抗体基因进行拆装和改建，发展出种种适合不同需求的基因工程抗体及其改型抗体。由于抗体在为人类疾病的预防、诊断和治疗等等方面做出了巨大贡献，世界各国对抗体研究都很重视。相信随着对抗体的不断更加深入的研究，人们对优质抗体的需求量会逐步增加，抗体的生产研究在未来会变得更加朝阳。二、武汉爱博泰克生物科技公司简介武汉爱博泰克生物科技有限公司坐落在武汉光谷生物城，一直致力于提供专业的多克隆与单克隆抗体制备服务以及诊断试剂盒研发等服务，是一家开

4、发、生产、销售抗体及诊断试剂的生物技术公司。公司已拥有一支经验丰富的多能型技术研发人才队伍和优秀的管理团队，拥有强大的产品生产线。爱博泰克生物主要服务于生物科研与医药市场，免疫动物种类包括小鼠、大白兔、大鼠、鸡、山羊和绵羊等。公司目前已经成功实现了抗体的通量生产，拥有国内最专业的基因组文库，目标是每一个人类基因对应一个全长基因，一个高表达克隆和一个成功制备的抗体。正准备向全球提供高通量的人类基因组抗体，同时提供人类15000个全长基因cDNA文库及其他克隆产品、载体构建、蛋白表达、多肽合成、多肽藕联、动物免疫、抗原亲和纯化、Western-Blot、免疫组化IHC、全基因合成等技术服务。一、

5、工作岗位分析公司现阶段主要从事与多抗和单抗的高通量生产，总的生产流程包括：表达质粒的构建-抗原蛋白的表达和纯化-免疫实验动物-杀实验收集抗血清-抗体的纯化-抗体的检测我在公司实验室里主要从事分子克隆部分（表达质粒的构建）的工作：提取质粒、质粒的转化、表达载体的构建等等。一下是我在实验室工作的一些具体内容。1、质粒的提取（使用AXYGEN公司的小抽质粒试剂盒）(1)从平板上挑取单菌落或摇甘油菌（50-100µL），接种于3ml的LB液体培养基中（加入相应的抗生素,如Ampicillin、Kanamycin等），37℃振荡培养过夜。(2)取2.5ml的菌液于2.5ml的已经灭菌的EP管中，120

6、00rpm离心2min，弃上清后在滤纸上扣干。(3)加入250µL溶液S1，在涡旋振荡器上振荡使菌体充分悬浮，不能留有沉淀。(4)加入250µL溶液S2，立即轻轻翻转3-5次，使溶液Ⅱ充分与菌体接触，，使菌体裂解充分，该过程可观察到原浑浊的菌悬浮液变清变粘。（5）加入350µL溶液S3，立即上下颠倒充分混匀7-10次，不宜太剧烈，避免断裂的基因组DNA污染。可观察到白色絮状物出现。（6）12000rpm离心6-8min，使白色絮状物完全沉淀在EP管。吸取上清液至吸附柱（注意：不要吸取沉淀，避免沉淀堵塞吸附膜），12000rpm离心1min.（7）倒掉滤液，向吸附柱加入500µLS1，1200

7、0rpm离心1min再次倒掉滤液，向吸附柱加入700µLS2，12000rpm离心2min，倒掉滤液（重复2次）（8）将吸附柱放回EP管，1200rpm离心4min，尽量除去残余乙醇（9）将吸附柱放在新的EP管上，静止3min，使乙醇挥发。然后向滤膜中间加入40µl纯净水，1200rpm滤液即为质粒溶液，取2µL电泳检测，其余-20℃冷藏备用。质粒电泳图片：1、亚克隆用限制性酶切或PCR等手段从已经克隆的DN