微生物克隆文库的综述

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1、JISHOU　UNIVERSITY本科生毕业论文题目：微生物克隆文库的综述作者：学号：20114071021所属学院：生物资源与环境科学学院专业年级：11级生物科学（师范）指导教师：职称：副教授完成时间：2015年4月5日吉首大学教务处制独创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。论文题目：作者签名：

2、日期：年月日论文版权使用授权书本人完全了解吉首大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意吉首大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)论文题目：学生签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日目录摘要1Abstract1前言21具体微生物克隆文库的目的和意义42构建微生物克隆文库的方法52.1技术路线52.2获取目的基因62.3质粒的准备过程6参考文献9致谢10微生物

3、克隆文库的综述摘要：在微生物领域研究中，想要更加深入全面的了解微生物在理化性质上形成的机理，需要有针对性的对各种菌理化特性进行研究。然而近年来的研究发现传统培养微生物的方式和鉴定手段上存在着很多弊端,例如，微生物的组成，生微生物种间关系。因此，必须探索新的微生物培养研究方法。随着分子生物学技术的快速发展，许多种微生物克隆方法都应运而生，在实验中不段发展、完善。该文就现阶段微生物克隆的概念，意义，以及方法进行简要概述。关键字微生物，微生物克隆文库，方法；前言在微生物生态学研究中，分子生物学的理论与技术至关重要,微生物多样性的研究有了许多

4、突破，其结果更趋于真实。基因是细胞内具有遗传效应的特定的脱氧核苷酸序列，即DNA分子片段。基因克隆技术是分子生物学手段上的一系列技术。美国斯坦福大学的伯(P．Berg)等合成一种新的重组DNA分子，为基因克隆技术的研究奠定了基础[1]。科恩(S．Cohen)等人把一段外源DNA片段与质粒DNA连接组成的重组质粒转入大肠杆菌，首次完整地建立了基因克隆体系[2]。1具体构建微生物克隆文库的目的和意义构建微生物克隆文库的开始阶段，需要要查看大量的文献，弄清楚该微生物基因的相关理化特性。微生物克隆文库是一种结合生物学、基因组学和生物信息学等学

5、科知识技术方法,首先以微生物基因组DNA的序列信息为依据,通过分析样品中DNA分子的种类和数量来反映微生物区系的组成和群落结构及其变化[3]。构建克隆文库是微生物分子生态学中用来研究微生物组成的常用方法之一[4],目前细菌菌群分析中应用最多的是16SrDNA克隆文库方法。它是通过对16SrDNA全长序列进行扩增和分析,达到研究和监测样品与环境中细菌多样性、种群结构和区系变化的目的[5-6],并应用于水体、土壤、海洋沉积物、生物水处理系统中的微生物分析。本文采用建立16SrDNA克隆文库的方法,通过测序并与已知序列比较确定细菌种类,以揭

6、示有机物料腐熟菌剂样品中的细菌组成,同时也可以根据克隆文库中克隆子出现的频率了解样品的细菌组成比例。2构建微生物克隆文库的方法2.1技术路线转化PCR获取样品产物纯化CHUNHUA克隆文库连接→→→→→2．2获取目的基因目的基因的序列已知时，通常利用PCR(PolymeraseChainReaction，即多聚酶链式反应)技术来分离目的基因序列。PCR技术是1985年由美国Cetus公司开发的分子生物学技术，它具有能专一、快速、简便。高效地体外扩增特定的DNA片段的功能，在微生物克隆文库领域应用广泛。此外，对于一些未知核苷酸序列核酸片

7、段，一些经过改进的PCR法可以对其特异扩增[7]。这是方法参考了已知基因的序列克隆基因技术。在已知的许多的植物基因序列中，当克隆类似基因时可先从Genebank库中找到有关基因序列，用PCR方法克隆到不同植物的基因。但是对于知道功能，已知类似序列的基因却查不到，这一方法不能使用。PCR方法简便快速，适用于此方法去克隆目的基因。例如：国内利用PCR方法已经克隆到豌豆外源凝集素基因[8]，酵母超氧化物歧化酶基因[9]、水稻富硫10KD醇溶蛋白基因[10]。PCR扩增法的一般操作程序如下:(1)目的基因序列的扩增。如果目的基因序列已知，就可

8、以通过设计引物进行PCR;未知基因序列时，可以经过Genebank根据保守序列设计引物扩增。(2)PCR扩增产物的连接、转化、重组、筛选。2.3质粒的准备过程质粒DNA的准备工作，运用实时荧光定量PCR方法，通过已知绝对