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《过表达外源性ccn1促进放创复合伤愈合的作用和机理研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、16过表达外源性CCN1促进放创复合伤愈合的作用和机理研究杜业军1，司维柯1△，粟永萍2△，何通川3，李军1，潘静1，李招权1,（1.第三军医大学医学检验系临床血液学教研室；2.第三军医大学军事预防医学院，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，中国重庆400038；3.美国芝加哥大学医学中心分子肿瘤学研究室；美国芝加哥60637）摘要目的：利用AdEasy系统构建带有报告基因RFP的重组腺病毒AdCCN1,感染放创复合伤大鼠的创面，观察外源性CCN1对放创复合伤愈合的影响。方法：用酶切连接的方式将pCMV-CCN1中的小鼠CCN1表达框连入pAdTrace-TO4穿
2、梭载体中获得pAdTrace-CCN1，线性化后在AdEasy-1大肠杆菌中同源重组，获得pAdCCN1重组腺病毒质粒，线性化后转染293细胞进行病毒颗粒包装并扩增病毒，再感染中国仓鼠卵巢细胞CHO和创面组织细胞。WesternBlot和免疫组化鉴定CCN1在CHO细胞的分泌和创面组织细胞中的表达。放创复合伤动物模型建立后，立即在创面边缘分别皮下注射等量AdCCN1病毒和AdRFP病毒，7天后取材固定制作石蜡切片，HE染色观察创面愈合情况，免疫组化检测MMP1、TIMP1、bFGF等创伤愈合相关因子表达。结果：酶切鉴定pAdTrace-CCN1和pAdCCN1与
3、预期相符，用WesternBlot和IHC鉴定CCN1在CHO细胞均表达，并且在创面组织中高表达。与AdRFP对照相比，AdCCN1组创面成纤维细胞增多，微血管密度增高，MMP1、TIMP1、bFGF等创伤愈合相关因子表达均升高。结论：CCN1具有促进创伤愈合的作用，其机制可能与CCN1促进成纤维细胞增殖和迁移，促进血管形成，并且调控了创伤修复相关因子表达有关。关键词CCN1/Cyr61；重组腺病毒；伤口愈合；辐射TheEffectsofExogenousOver-expressedCCN1onHealingProcessofCombinedRadiationa
4、ndWoundInjuryDUYe-jun1,SIWei-ke1,SuYong-ping2,HETong-chuan3,LiJun1,PanJing1,LiZhao-quan1（1.DepartmentofClinicalHematology,ThirdMilitaryMedicalUniversity,2;StateKeyLaboratoryofTrauma,BurnsandCombinedInjury,InstituteofCombinedInjury,Collegeof基金项目：全军“十一五”国际合作项目（06H034）；创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室开
5、放课题（2006）作者简介：杜业军，男，湖北人，硕士，主要从事创伤修复研究。电话：（023）68752311，E-mail：duyejun@yahoo.com.cn通信作者：司维柯，电话：（023）68752312，Email：weikesi2004@hotmail.com；粟永萍，电话：（023）68752009，Email：suyping@yahoo.com16PreventiveMedicine,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China.3.MolecularOncologyLaborator
6、y,DepartmentofSurgery,UniversityofChicagoMedicalCenter,Chicago,60637.USA)ObjectiveToconstructRecombinantAdenovirusAdCCN1withreportinggeneRFPusingAdEasysystem,theninfectthesuperficialwoundoftheratssufferedwithcombinedradiationandwoundinjury,andtoobservetheeffectofexogenousover-express
7、edCCN1onhealingprocessofcombinedradiationandwoundinjury.MethodsInsertingtheopenreadingframe(ORF)ofmousegeneCCN1fromplasmidpCMV-CCN1intoshuttervectorpAdTrace-TO4byrestrictionenzymedigestingandligation,thengainedtheplasmidpAdTrace-CCN1,andlinearizedplasmidpAdTrace-CCN1wastransformedint
8、oAdEasy-1E.c
