肺癌细胞中sox1调控ect2的表达

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1、肺癌细胞中SOX1调控ECT2的表达李宁1李晓冰2李素云1（1河南中医学院第一附属医院，郑州，450008；2河南中医学院基础医学院，郑州，450008）[摘要]目的探讨肺癌细胞中SOX1基因是否直接调控ECT2的表达。方法以肺癌细胞株A549细胞为研究对象，Realtime-PCR检测ECT2表达情况。通过荧光素酶报告检查法以及染色体免疫共沉淀方法检测SOX1基因是否直接调控ECT2的表达。免疫组化检测60例肺癌组织中ECT2与SOX1表达的关系。结果过表达SOX1后A549细胞中ECT2表达下降，而siRN

2、A抑制SOX1后ECT2表达升高，荧光素酶报告检查法以及染色体免疫共沉淀方法提示SOX1可直接与ECT2启动子结合，抑制ECT2的表达。SOX1与ECT2在肺癌组织中表达负相关(r=-0.433，P=0.001)。结论肺癌细胞A549中SOX1基因直接调控ECT2的表达。[关键词]肺癌；SOX1；ECT2SOX1isanoveltranscriptionalrepressorforECT2inhumanlungcancerLiNing1LiXiao-bing2LiSu-yun11TheFirstAffiliat

3、edHospitalofHenanUniversityofTraditionalChineseMedicine;2BasicMedicalCollegeofHenanUniversityofTraditionalChineseMedicine,ChinaABSTRACTObjectiveTotestwhetherSOX1isanoveltranscriptionalrepressorforECT2inhumanlungcancer.MethodsTheexpressionofECT2intheA549cellw

4、asdetectedbyRealtime-PCR.WedeterminedwhetherSOX1mayregulatetheexpressionofECT2byusingChrominimmunoprecipitation(ChIP)assayandLuciferaseactivityassay.ImmunohistochemicalanalysiswasusedtotestwhetherthereisaninversecorrelationbetweenECT2andSOX1.ResultsEctopicex

5、pressionofSOX1intheA549cellrepressedECT2expression.Conversely,siRNAsilencingoftheSOX1geneincreasedECT2expression.WealsoshowthatSOX1directlyinteractedwithandrepressedtheECT2promoter.Moreover,theanalysisof60primarylungcancersamplesrevealedaninversecorrelationb

6、etweenECT2andSOX1levels(r=-0.433，P=0.001).ConclusionsSOX1isanoveltranscriptionalrepressorforECT2inhumanlungcancer.[KEYWORDS]Lungcancer;SOX1;ECT2肺癌是严重危害人类生命和健康的恶性肿瘤之一，也是世界范围内发病和死亡率最高的癌症。以顺铂为基础的化疗方案是目前针对NSCLC主要的治疗方法，然而，肺癌细胞对顺铂产生的耐药是困扰临床的难题[1]。SOX1，即SRY(sexdete

7、rminingregionY)-box1，属于具有highmobilitygroup(HMG)-box结构的转录因子家族SOX家族的成员。我们前期结果发现SOX1基因在A549细胞中处于非甲基化状态，在耐顺铂细胞株A549/cis细胞中处于高甲基化状态。抑制SOX1表达可通过激活肺癌细胞自噬能力，从而导致肺癌细胞耐药[2]。前期实验我们通过cDNA微阵列分析发现过表达SOX1后ECT2基因表达降低，本研究我们将探讨肺癌细胞中SOX1基因是否直接调控ECT2的表达。1材料与方法1.1材料与试剂人肺癌细胞株A549

8、细胞为本实验室保存；SOX1表达质粒p-CMV-SOX1及SOX1siRNA购自吉凯生物，ChIP试剂盒购自UpstateBiotechnology公司，Dual-Luciferase检测试剂盒及Transfect脂质体购自Qiagen公司。其他如RT及PCR相关试剂、DNAMarker、Trizol(TaKaRa公司)。1.2Realtime-PCR检测ECT2表达情况培养A549细