1212细胞培养法在生物材料相容性检测中的应用

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1、细胞培养法在生物材料相容性检测中的应用1.间接法琼脂覆盖法是间接法屮最典型的i种方法。这种方法是将把平铺在有单层细胞的培养皿中的含有培养液的琼层，在固化的琼脂层上放上进行试样细胞培养。这种方法的好处是不分材料都适用。当毒性发现早门较强时，溶出物的分子量就会变小，并且易溶于水。但是就算是冇毒的材料，如果溶出物分了量大并难溶于水，也就说明很难直接表现出其性质。2直接法组织反应的主要原因一般是生物材料小一些易溶出物质引起炎症反应。原料单体、低分子聚合物、催化剂等一般被称作是易溶出物质。有些专家捉出了用浸出液法来解决这些溶出物的细胞毒性。这种方法是应该在适当的条件下将试样放入培养液或蒸镭水

2、屮浸泡，产生出含冇溶出的浸泡液然后再加在含冇细胞的培养皿或试管中继续培养，看溶出物对细胞是否真的影响。但是结果证明两者之间并没有明显的差异。直接浸渍法：把形态不规则的试样（如金属粉末、汕脂类材料）等和细胞-起放入培养皿中进行培养的发法就是直接浸渍法。如來有溶出物的吋候就会对周围细胞产牛:影响。宁淑华等1988年用该法对医用硅胶及聚乙烯醇进行细胞毒性试验。有些学者认为对于形态不规则并冃•冇微量毒性的材料使用该法比较合适。细胞毒性试验方法冇很多种方法，并且每种方法都有各白的特征。但是每种试验方法的选择材料不同和原理都不同。根据实验材料本身理化性质、毒性成份表现形式、毒性作用强弱及材料用

3、途的选择的正确性是一种非常重要的实验方法。3实验细胞研究进展L-929细胞是当前细胞毒性试验中使川最早也是最广泛的细胞，该细胞在1948年Earle等学者从小鼠皮组织屮分离出来的成纤维细胞。而另一种细胞在是1953年Gay等学者在人体子宫肿瘤小分离出的子宫粘膜上细胞（Heal细胞）在人类方面的应用较多。由都有一个共同的特点就是这两种细胞传代的速度较快，能够快速的繁殖。而且容易在体外培养，方便储存。同时这两种已建立成系的细胞株能为实验提供稳定传代的细胞，能为许多材料细胞毒性评价所共川等优点。1982年美国质量标准I办会将L929细胞和Hale细胞推荐为细胞毒性试验中的标准细胞。L-9

4、29细胞主耍是从于小鼠的皮卜•组织取得的，而Hale细胞则从人的肿瘤组织中获得。这两种已建立成系的细胞株都具冇无限分裂增殖类似肿瘤细胞的特征。所以人们对利川这两种细胞来替代人体正常组织细胞评价材料的生物相容性的敏感性和可靠性都产生了怀疑。同时随着科学的进步和人们对材料植入人体后与机体组织Z间可能发住的反应其对材料的影响产生了浓厚的兴趣和认识。从九十年代起已经有很多的专家开始了对人体不同部位的组织来源细胞选择不同的材料植入。这样能够使结果更加准确和真实，同是也得到了很多专家的认口J与肯定。因为植入后的生物材料属于异物，所以免疫排斥反应是材料植入体内最普遍和最常见的反映。由于单核巨噬细

5、胞产生于人体的血液，所以在人体免疫系统中有着不可替的作用。作为能够释放各种刺激因子Uketidaide激活补体引起急慢性炎症反应，也同样能够同加快成纤维细胞生长促进伤口的愈合速度。所以单核巨噬细胞作评价材料细胞盘性的验细胞，冇助于人们了解材料置入体内引起的炎症反应对组织细胞的影响。4细胞毒性的观察方法以往对材料主物相容性的评价往往着眼于细胞的形态与数量，通过细胞形态的改变和数量的增减判断材料的细胞毒性。山于材料毒性成份对细胞的损伤，首先发纶细胞牛:物化学反应和生物分子结构的改变，出现代谢和机能的改变如线粒体氧化代谢障碍、蛋白质合成下降,细胞膜选择性通透屏障作川消失等，这种变化川形态

6、学方法通常不能发现。只冇当细胞死亡10h以上，细胞的白溶性变化相当明显的才能在光显微镜下根据细胞死亡的判断特点，即核浓缩、核碎裂、胞浆伊红染色等判断材料的细胞毒性程度。因此传统的细胞毒性观察方法不能及吋、准确地判断材料的细胞毒性。Mosroann在1983年提出了四甲基偶氮醴盐微量酶反应色法（MTT法），最开始在免疫学领域中流行。但是在最近几年，专家们开始尝试川该法应用到生物相容性评价中。其原理是线粒体琥珀酸脱氢酶能催化四甲基偶氮呼盐（MTT）形成兰色甲替。其优点是形成数目的多寡与活细胞数目和功能状态呈正相关，该法简单速度快、不接触同位索、而敏感性同位索法接近。荧光染色法：在细胞受

7、到损伤时，细胞膜的选择通透性屏障作用消失，利用乙酰乙酸荧光素和澳化乙锭快速进出细胞膜受损的细胞特点是其应用的优点。能够在荧光显微镜下迅速区分受损细胞，适合评价首先影响细胞膜功能的材料的生理相容性是其最突出的特点。在最近比较流行的分析细胞方法是流式细胞光度术（Flowcytometry,FCM）这种方法充分利用了鞘流原理，使被荧光标记的单个悬浮细胞排成门列，按重力方向流动。细胞被激光照射后反射荧光，检www.yxtll01.com测器械可逐个结细胞的荧光强度进行测定。F