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1、Notch信号通路在骨形态发生蛋白9诱导的多潜能干细胞成骨分化中的作用刘强，翁亚光，徐道晶，罗敏，唐敏（400016重庆，重庆医科大学医学检验系，临床检验诊断学教育部重点实验室）[摘要]目的初步探讨Notch信号通路对骨形态发生蛋白9（bonemorphogeneticprotein9,BMP9）诱导多潜能干细胞成骨分化的作用和机制。方法腺病毒表达载体（AdBMP9/AdGFP、AdHey1/AdRFP）和BMP9/GFP条件培养基处理C2C12细胞，细胞化学染色和活性定量检测早期成骨标志物AL
2、P，定量RT-PCR检测Notch信号通路靶基因Hey1，以了解Hey1在AdBMP9介导的成骨分化作用中的表达和作用；采用细胞密度实验和Notch信号通路抑制剂（DAPT）了解Notch信号通路对成骨的影响；检测AdBMP9/AdGFP处理下，细胞上Notch信号通路配体、受体表达变化。结果AdBMP9作用下，1、3、5、7dALP活性持续增加(P<0.05)；Hey1一过性升高，其与AdBMP9呈剂量依赖性；Hey1可协助BMP9成骨（P<0.05），不能单独起效。80%和40%细胞密度组A
3、LP量（P<0.05）和Hey1表达均高于20%组；DAPT组中ALP活性明显降低（P<0.05）；在AdBMP9作用下，Notch信号通路配受体有不同程度的上调，其中受体Notch4和配体Jag-1上调最为明显（分别为11.3和5.1倍）。结论Notch信号通路参与BMP9介导的多潜能干细胞成骨分化，其可能的机制是BMP9通过诱导Notch通路配体、受体表达上调使Hey1升高，后者协同成骨。[关键词]Notch信号通路；骨形态发生蛋白9；多潜能干细胞；发状分裂相关增强子-1；N-[N-(3,5
4、-Difluorophenacetyl-L-alanyl)]-S-phenylglycinet-ButylEster,DAPT[中图书分类号]Q254[文献标识码]A[基金项目]重庆市科委基金（CSTC2008BB5396）。[通信作者]唐敏，电话：86-23-68485223，E-mail：catom@126.comTheroleofNotchsignallingpathwayinosteogenicdifferentiationofMultipotentStemCellsinducedbyB
5、oneMorphogeneticProtein9LIUQiang,WENGYa-guang,XUDao-jing,LUOMin,TANGMin1(DepartmentofLaboratoryMedicine,KeyLaboratoryofLaboratoryMedicalDiagnostics,MinistryofEducation,ChongqingMedicalUniversity)【Abstract】ObjectiveTostudytheroleofNotchsignallingpathw
6、ayinMultipotentstemcells-inducedosteogenicdifferentiationbybonemorphogeneticprotein9(BMP9).MethodsInordertostudytheroleofHey1inmultipotentstemcells-inducedosteogenicdifferentiationbyBMP9,theC2C12cellsweretreatedbyadenovirusvector(AdBMP9/AdGFP,AdHey1/
7、AdRFP)andBMP9/GFPconditionedmedium,andthentheALPwasdetectedbycellchemistrystainingandquantitativedetectionandHey1expressionlevelwasdetectedbyqRT-PCRrespectively.Moreover,tostudytheroleofNotchsignalingpathwayinmultipotentstemcells-inducedosteogenicdif
8、ferentiationbyBMP9,wedesignedthecell-densityexperimentandNotchsignalingpathwayinhibitor(DAPT)experiment;andforAdBMP9/AdGFPtreatedcells,detectionofNotchreceptorsandligandswereneeded.ResultsInAdBMP9treatedgroup,theactivityofearlyosteogenicmarkerALPincr
