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1、附录xna无菌检查法无菌检查法系川于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查应在坏境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微牛物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微牛物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合
2、无菌检査的要求。口常检验还需对试验环境进行监控。无菌检杳人员必须具备微牛物专业知识，并经过无菌技术的培训。培养基培养基的制备培养棊可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养棊。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2°C〜251、避光的环境，若保存于非密闭容器中，-•般在三周内使用；若保存于密闭容器中，一•般可在一年内使用。1.硫乙醇酸盐流体培养基酪月东（胰酶水解）15.0g酵母浸出粉5.0g葡萄糖5.0g氯化钠2.5gL・胱氨酸0.5g新配制的（）.1%刃夭青溶液1.0ml硫乙醇酸钠0.5g琼脂0.75g（或
3、硫乙醇酸）(0.3ml)水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤淸，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7」土0.2。分装至适宜的容髀中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养皋氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2,灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5,否则，须经100°C水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。2•改良马丁培养基月东5.0g磷酸氢二钾l.Og酵母浸出粉2.0g硫酸镁0.5g衙萄糖20.0g水
4、1000ml除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH值约为6.8,煮沸，加入葡萄糖溶解后,摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2,分装，灭菌。3•选择性培养基按上述硫乙醇酸盐流体培养基或改E马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或衣面活性剂,英用量同验证试验。4•营养肉汤培养基牛肉浸出粉lO.Og3・0g取上述成分混合，微温溶解，调节氯化钠5.0g1000mlpH为弱碱性，煮沸,滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,分装，灭菌。5・营养琼脂培养基调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,按上述营养肉汤培养
5、基的处方及制法，加入14.0g琼脂,分装，灭菌。6・改良马丁琼脂培养基按改良马丁培养基的处方及制法，加入14.0g琼脂，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2,分装,灭菌。培养基的适用性检査无菌检杏用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基应符合培养基的无菌性检杳及灵敏度检查的要求。本检查町在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。无菌性检查每批培养基随机抽取不少于10支（瓶），5支（瓶）置30°C〜35°C另5支（瓶）置20°C〜25°C培养14天，均应无菌生长.灵敏度检査菌种：培养基灵敏度检査所川的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存屮心获
6、得的冷冻干燥菌种为第0代），试验川菌种应采川适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物沖特性。金黄色衙萄球菌(Staphylococcusaureus)(CMCC(B)26003)铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)(CMCC(B)10104)枯草芽砲杆菌(Bacillussubtilis)(CMCC(B)63501)生砲梭菌(Clostridiumsporogenes)(CMCC(B)64941)H色念珠菌(Candidaalbicans)(CMCC(F)98001)黑曲霉(Aspergillusniger)(CMC
7、C(F)98003)菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种牛抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30°C〜35°C培养18小时〜24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养皋屮或改良马丁琼脂培养皋上,20°C〜25°C培养24小时〜48小时，上述培养物用0.9%氯化钠溶液制成每lml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上，23°C〜28°C培养5天〜7天,加入3ml〜5ml无菌的含0.05%(v/v)聚山梨酯8
8、0的0.9%氯化钠溶液,将抱子洗脱。然后，用适宜的方法吸出他子悬液至无菌试管内，用无菌的含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%氯化
