生物技术制药期末解答

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1、1.基因工程药物生产的过程：①基本过程：获得目的基因f组建重组质粒一构建基因工程菌（或细胞）一培养工程菌一产物分离纯化一除菌过滤f半成品检定f成品检定一包装②主耍步骤：冃的基因的克隆，构建DNA重组体，构建工程菌，H的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化，产品的检验。③基因工程药物的牛产必须首先获得目的基因，然后用限制酶和连接酶将所需目的基因插入适当的载体质粒或噬菌体中并转入大肠杆菌或其他宿主菌，以便大量复制口的基因。F1的基因获得后，最重要的是使目的基因正确表达。将目的基因与表达载体重组，转入合适的表达系统，获得稳定高效表达的基因工程菌。2.基因

2、工程菌的不稳定性基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。基因工程菌的质粒不稳定常见的是分裂不稳定。质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象。它主要与两个因素相关：一是含质粒菌产生不含质粒了代菌的频率，质粒丢火率与宿主菌、质粒特性和培养条件冇关；二是这两种菌比生长速率差异的人小。质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。质粒口发缺失与质粒中短的疋向重复序列Z间的同源重组有关，具有两个串联启动子的质粒更容易发生缺失；在无同源性的两个位点之间也会发生缺失

3、；培养条件也会对质粒结构不稳定性产生影响。3.实现高密度发酵的方法：（1）发酵条件的改进①培养基的选择：高密度发酵过程屮匸程菌在短时间内迅速分裂增殖，使菌体浓度迅速升高，而工程菌提高分裂速度的基本条件是必须满足其牛长所需的营养物质。在培养基成分的选择上，耍尽虽选择容易被工程菌利用的营养物质。普遍釆用6g/L的U•油作为高密度发酵培养基的碳源。其各组分的浓度也要比普通培养基高2-3倍。②建立流加式培养方式：当碳源和氮源等营养物质超过一定浓度时可抑制菌体牛•长，这就是在分批培养基中增加营养物浓度而不能产生高细胞密度的原因，因此高密度发酵是以低于抑制阈的浓

4、度开始的，营养物则是在盂维持高生长速率时才添加的，所以补料分批发酵已被广泛用于各种微生物的高密度发酵。③提高供氧能力：在发酵过程中为提高溶氧浓度，现在的小型发酵罐一•般采用空气与纯氧混合通气的方法提高氧分压，也可通过增加发酵罐的压力來达到此目的。（2）构建出产乙酸能力低的工程化宿主菌①阻断乙酸产生的主要途径②对碳代谢流进行分流③限制进入糖酵解途径的碳代谢流④引入血红蛋白基因（3）构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌为了使对蛋口水解酶比较敏感的目标蛋口也能获得较高水平的表达，需要构建蛋口水解廨活力低的工程化宿主菌。4.生产用动物细胞的要求和获得①原代细胞

5、：原代细胞是直接取白动物纽织、器官、经过粉碎、消化而获得的细胞悬液。1.基因工程药物生产的过程：①基本过程：获得目的基因f组建重组质粒一构建基因工程菌（或细胞）一培养工程菌一产物分离纯化一除菌过滤f半成品检定f成品检定一包装②主耍步骤：冃的基因的克隆，构建DNA重组体，构建工程菌，H的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化，产品的检验。③基因工程药物的牛产必须首先获得目的基因，然后用限制酶和连接酶将所需目的基因插入适当的载体质粒或噬菌体中并转入大肠杆菌或其他宿主菌，以便大量复制口的基因。F1的基因获得后，最重要的是使目的基因正确表达。将目的基因与表达

6、载体重组，转入合适的表达系统，获得稳定高效表达的基因工程菌。2.基因工程菌的不稳定性基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。基因工程菌的质粒不稳定常见的是分裂不稳定。质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象。它主要与两个因素相关：一是含质粒菌产生不含质粒了代菌的频率，质粒丢火率与宿主菌、质粒特性和培养条件冇关；二是这两种菌比生长速率差异的人小。质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。质粒口发缺失与质粒中短的疋向重复序列Z间的同源重组有关，具有两个

7、串联启动子的质粒更容易发生缺失；在无同源性的两个位点之间也会发生缺失；培养条件也会对质粒结构不稳定性产生影响。3.实现高密度发酵的方法：（1）发酵条件的改进①培养基的选择：高密度发酵过程屮匸程菌在短时间内迅速分裂增殖，使菌体浓度迅速升高，而工程菌提高分裂速度的基本条件是必须满足其牛长所需的营养物质。在培养基成分的选择上，耍尽虽选择容易被工程菌利用的营养物质。普遍釆用6g/L的U•油作为高密度发酵培养基的碳源。其各组分的浓度也要比普通培养基高2-3倍。②建立流加式培养方式：当碳源和氮源等营养物质超过一定浓度时可抑制菌体牛•长，这就是在分批培养基中增加营

8、养物浓度而不能产生高细胞密度的原因，因此高密度发酵是以低于抑制阈的浓度开始的，营养物则是在盂维持高生长速率时