g蛋白偶联受体在雌激素诱导人甲状腺未分化癌fro细胞增殖中的作用及其机制

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1、G蛋白偶联受体在雌激素诱导人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制吴婷婷，龙方懿，贾朝莉，刘智敏（400016重庆，重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室）[摘要]目的探讨G蛋白偶联受体（G-proteincoupledreceptor，GPER）在雌激素促进人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制。方法不同浓度（0～10-8mol/L）的17β-雌二醇（17β-Estradiol，E2）处理FRO细胞不同时间（0～24h），MTT法检测细胞增殖率；10-8mol/L的E2处理FRO细胞不同时间（0～24h），流式细胞术检测E2对FRO细胞周期的影响；设

2、计合成针对GPER的小干扰RNA（GPER-siRNA）并转染FRO细胞；Westernblot检测FRO细胞中Akt与ERK1/2磷酸化水平与GPER蛋白的表达。结果不同浓度（0～10-8mol/L）的E2处理FRO细胞不同时间（0～24h），细胞增殖率随浓度和时间的增加而增加，且10-8mol/L的E2处理24h后，细胞增殖率为（16.5±2.1）%；10-8mol/L的E2处理FRO细胞不同时间（0～24h），细胞周期S/G2/M期细胞的比例随时间的增加而增加；E2（10-8mol/L）处理FRO细胞不同时间（0～30min），ERK1/2与Akt的磷酸化水平分别在15

3、min与10min达到最大；将GPER-siRNA转染FRO细胞48h，GPER的蛋白表达显著减少；E2作用于分别加入PD98059（30μmol/L）、LY294002（50μmol/L）以及转染GPER-siRNA的FRO细胞15min和10min，与E2处理组相比，ERK1/2和Akt的磷酸化水平降低；E2作用于分别加入PD98059、LY294002及转染GPER-siRNA的FRO细胞24h，与E2处理组相比，增殖率由（16.5±2.1）%降至（11.2±1.3）%、（9.6±1.5）%、（7.2±1.3）%（P<0.05）。结论E2通过GPER激活ERK1/2、P

4、I3K-Akt途径，促进FRO细胞的增殖。[关键词]雌激素；甲状腺癌；GPER；ERK1/2；PI3K-Akt[中图法分类号][文献标志码]AEffectsofGPERon17β-EstradiolinducedproliferationofhumananaplasticthyroidcarcinomaFROcellsWuTingting，LongFangyi，JiaChaoli，LiuZhimin（Departmentofbiochemistryandmolecularbiology，ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400016,C

5、hina）[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofGPER(G-proteincoupledreceptor)on17β-Estradiol(E2)inducedproliferationofhumananaplasticthyroidcarcinomaFROcells.MethodsHumananaplasticthyroidcarcinomaFROcellsweretreatedwithdifferentconcentration(0-10-8mol/L)ofE2fordifferenttimes(0-24h)andcellg

6、rowthratewasevaluatedbyMTTassay.TreatmentofE2fordifferenttimes(0-24h),thenchangesofcellcyclewereanalyzedbyflowcytometry.RNAinterferenceagainstGPER(GPER-RNAi)wasdesignedandsynthesized，thentransfectedtoFROcells．ThelevelsofphosphorylatedERK1/2,phosphorylatedAktandGPERwereanalyzedbyWesternblot.

7、ResultsTreatmentwithdifferentconcentration(0-10-8mol/L)ofE2forfordifferenttimes(0-24h),thecellgrowthratesincreasedindose-andtime-dependentmanners.WhenFROcellsweretreatedwithE2(10-8mol/L)for24h，thecellgrowthratewas(16.5±2.1)%.TreatmentwithE2(10-8mol/L)for