新药研究中稳定性指示的分析方法开发与验证概要

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1、新药研究中稳定性指示的分析方法开发与验证概要药物非临床研究与稳定性指示方法非临床研究制剂（也称为临床前或非GLP制剂）在药物的早期开发中起着关键作用。这种制剂能够把药物（原料药）带入到试验动物中进行药动学和毒理学研究。由于这些研究最终会用于支持人的剂量和安全性，因此对了解药物的浓度、PK/PD、工艺杂质和降解杂质的安全性数据是很重要的。因此，业内人士已开展对能够准确检测和定量药物活性成分、杂质、降解杂质的方法进行开发和验证。这种方法往往能够提供稳定性的趋势性结果，因此称为稳定性指示方法。本文对非临床研究制剂稳定性指示方法的开发和验证进行了

2、综述，为从事和关研究的团队提供指导。药物开发根据需要包括许多阶段。尽管非临床阶段并不需要分析降解产物，但是很多公司述是要更多了解活性成分，如，在这个阶段研究降解产物。此阶段获得的毒理学数据能了解药物、杂质及降解产物的安全性，因此后续阶段中会出现哪些杂质、每个杂质有多少量是很重要的。目前的指导原则强调后期的验证，没有在非临床阶段涉及稳定性指示方法。本文综述了几种方法来进行稳定性指示方法的开发和验证，对降解产物进行定量测定。这些建议不是技术上必须遵循的规定,而是为那些想把这种方法引入到非临床研究中的人员提供基本思路。本文重点关注小分子药物非临

3、床制剂杂质和降解产物的分析方法开发和验证。稳定性指示方法开发和验证中的重要问题分析研究中使用的所有分析方法都应该是符合其使用B的，能够获得可靠结果并没有显著偏差的。这些非临床研究屮的分析方法主要在于提供微量杂质和降解产物的定量结果。用于稳定性指示方法的开发与验证应基于此目的进行设计，保证具有足够的选择性、灵敏度。有儿个重要的部分需要考虑：（1）降解试验在非临床研究中，如果有足够的时间和样品，在稳定性指示方法的开发中应考虑进行降解试验研究。通常，在这个阶段，药物的工艺杂质已经确定，强制降解研究可以为药物由于化学或者物理不稳定性结果提供一个多

4、维度的分析。方法开发中的降解试验应对潜在的氧化、光照、水解杂质具有选择性。需要注意的是降解试验屮产生的降解物在正常贮藏条件也可能或不可能产生。如果降解产物可能引起安全性或毒性问题，在临床前研究中应进行必要研究。所有的降解试验可以使用活性成分预期浓度的储备液进行。实验应在活性成分的预期剂量浓度下用原液进行，可以采用确定处方进行配制，如果处方没有最终确定，可采用溶液进行。考虑降解条件，储备液可以采用乙月青•水和甲醇•水作为溶剂配制，推荐配制质控样品。所有的降解产物的UV光谱应采用PDA检测器测定。如果没有PDA检测器，UVA/is检测器应使用

5、210-220nm的检测波长，但是此时，是无法获得峰纯度数据的。UV光谱应与活性成分进行比较，以确定杂质、降解产物的相对响应是否与主峰一致。例如如果方法的检测波长为235nm,降解产物在这个波长下没有吸收，那么这个杂质就不会获得质量平衡。任何降解试验应在短期或者不苛刻的条件下进行。主要降解途径的敏感性可以通过观察活性成分的降解程度来获得。如果出现10%或更少，说明在临床前制剂中出现的可能性小，如果药物损失较大，说明在临床前制剂屮出现潜在降解产物的可能性大，应该在方法验证屮对降解产物进行分离度和定量考察。确定关键的降解途径有助于对临床前处方

6、和贮藏条件进行确定。以下为儿个常见的降解试验设计：■自由基氧化可以使用偶氮二异丁睛(Azobisisobutyronitrile,AIBN)来进行研究。取约10mg的AIBN,加入到盛有10ml储备液的20ml量瓶中，在40°C下反应天。•亲核氧化反应可以通过在储备液中或处方中加入稀过氧化氢溶液，在室温下反应24h进行。可能产生N■氧化物或亚砚杂质。-酸水解可以通过在储备液中或处方中加入稀盐酸溶液进行。降解溶液可以在室温或60°C条件下放置3天。同理，碱水解可以通过稀氢氧化钠溶液以相同方式获得。二者可采用相应的酸碱稀溶液进行中和。-光降解

7、试验可以采用乙睛/水或甲醇/水储备液或计划处方，在ICH规定光照箱中进行10w/m2的20h试验。•热降解试验可以采用储备液在高温下进行，典型条件是在60°C进行24-48h,基于贮藏条件，其他室温以上的条件也可以采用。-质量平衡应进行考虑，有很多因素会导致质量不平衡，如：降解产物没有发射团、在死体积时洗脱下来、极性太大、或由于疏水性强，特别是如果形成了二聚体或加合物，而没有在梯度条件下被洗脱下来。对于非临床分析，通常认为所有的杂质具有相同的响应因子，如果在检测波长下降解产物的响应因子与火活性成分差异较大(超过20%),可能就不会获得质量

8、平衡。如果由于上述原因没有获得质量平衡，结果应进行记录，并在后续开发阶段进行进一步研究。<2）降解试验的问题解答与任何方法开发项目一样，实际发生的事情往往与计划不同。以下是一些处理问题的方法。