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1、森林冬虫草治疗白血病的研究白血病是造血系统的恶性肿瘤，治疗方法包括联介化疗、放射治疗、免疫治疗或骨髄移植等，这些治疗方法或在杀伤肿瘤细胞的同吋，也损伤了机体正常细胞，或费用昂贵，所以研究抑制白血病细胞增殖或诱导英向正常成熟细胞分化的药物，成为治疗研究的热点。研究表明，口血病细胞K562细胞可在不同的分化诱导剂作用下分别向巨核细胞系，红细胞系及巨噬细胞系分化【5-7】,口血病细胞HL-60细胞在分化诱导剂的作用下能向屮性粒细胞及单核细胞分化[8-9]o森林冬虫草是一种冬虫草新种，含冇冬虫草稀冇的水溶性虫草多糖。我们对森林冬虫草抗纶素及其胞外水溶
2、性虫草多糖(CDP)进行研究，证明它们有清除口由基和抗辐射、抗癌的作用及免疫调节能力。基于森林冬虫草胞外水溶性虫草多糖CDP的抗癌、抗辐射及免疫调节等作用，木研究探讨CDP对口血病细胞K562和HL-60的诱导分化作用，旨在为临床用药提供实验依据。实验研究表明，森林冬虫草水溶性多糖CDP(1000mg/L)不但可显箸诱导人红口血病(慢性髓细胞口血病)K562细胞向红细胞分化，而且也可以诱导人早幼粒口血病HL-60细胞向粒细胞分化。下而为实验过程及步骤：1材料和方法1.1材料RPMI1640购于GIBC0公司，森林冬虫草水溶性多糖CDP由野生森
3、林冬虫草提取、鉴定,Nikon倒置荧光显微(TE2000-U)及摄影系统，LD4-2A型低速离心机。1.2方法1.2.1K562细胞诱导分化将人红口血病K562(慢性髓细胞口血病)细胞悬浮于完全RPM1640培养基中,内含10%新生小牛血清、100U/ml青霉素及100U/ml链霉素,在37C、5%C02培养箱中传代培养。将牛:长良好的细胞制成6X105/ml细胞悬液，接种于24孔板中,每孔lml,每平行3孔为1组，分别加lml不同浓度的诱导分化剂(CDP终浓度分别为lmg/L.10mg/L>100mg/L、1000mg/L),阳性对照加2%
4、的二甲亚M(DMSO)lml，阴性对照加RPM11640lml,置于37°C、5%C02培养箱中2d后，每组取少虽细胞悬液(50uL)用台盼蓝染色法计数死活细胞数,剩余细胞悬液(1950uL)离心10min,取细胞沉淀20uL,加血红蛋白转化液(文齐氏液)5nil,转化5min,于血红蛋白仪上测血红蛋白值。1.2.2I1L-60细胞诱导分化将人早幼粒口血病IIL-60细胞悬浮于完全RPM11640培养基中,内含10%新生小牛血清、100U/ml#霉素及100U/ml链霉素,在379、5%C02培养箱中传代培养。将生长良好的细胞制成2X105/
5、ml细胞悬液,接种于24孔板中，每孔lml,每平行3孔为1组,分别加lml不同浓度的诱导分化剂（CDP终浓度分别为lmg/L、10mg/L、100mg/L>1000mg/L）,阴性对照加RPMI1640lml,置于37°C、5%C02培养箱中作用2d后，同法离心，取细胞沉淀涂片，迅速风干，瑞氏染色，显微镜计数200个细胞，观察细胞分化程度。1.3判断指标柑橘每孔活K562细胞数、死K562细胞数计算细胞存活率【细胞存活率二活细胞数/（活细胞数+死细胞数）X100%】,根据血红蛋白仪检测值计算每106个K562细胞所含血红蛋白量，根据分类计数结
6、果计算IIL-60细胞分化率。1.4统计学分析采用SPSS13.0软件进行数据统计分析。实验数据以x土s表示,实验组与对照组用Dunnett-t检验，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05有统计学意义。2结果2.1CDP对K562细胞存活率及血红蛋白含量的影响台盼蓝染色观察K562细胞，随着诱导分化剂（森林冬虫草水溶性多糖CDP）浓度的增高,细胞存活率逐渐增高，细胞内血红蛋白含最也逐渐增加，其含最可达到阴性对照的2倍，阳性对照的1.6倍，见表1。表1不同浓度CDP对K562的细胞存活率和血红蛋白含量的影响组别CDP(mg/L)细胞存活率（%
7、）血红蛋白（mg）阴性对照组074.600±3.4660.091±0.020阳性对照组1%DMSO78.100±1.7450.148±0.005(1)CDP处理组146.400+2.709(1)0.093±0.0041053.200±0.026(1)0.118±0.0041005&100±1・863(1)0.133±0.005(1)100092.800±1.601(1)0.188±0.020(2)与阴性对照组比较,(l)P<0.05,(2)P<0.012.2CDP对IIL-60细胞形态学的影响在液体培养基条件FHL-60细胞多为原始细胞，呈圆
8、形或椭圆形，大小不一，核为圆形或椭圆形，核染色质疏松细致，核浆比例大，几乎没有分化细胞。经CDP处理后，细胞形态学上趋于分化成熟，表现为胞浆增多，核浆比变少，核仁减
