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1、生物工程专业综合（设计）性大实验报告书（好氧发酵）学生姓名:学号:班级:专业:指导教师:生工2102生物工程葛飞2013年12月定物工程专业设计(综合)实验安徽工程大学实验掖告书学生姓名：学号：专业班级：牛工2102实验类型：□验证■综合口设计口创新实验口期：12.27〜12.29实验成绩:实验背景mb纳豆菌通常为(0.7-0.8)umx(2.0-3.0)um,¥兰氏阳性。生长在葡萄糖琼脂的细胞原生质染色均匀。芽砲椭圆形或柱状，中生或偏中生，即使抱囊膨大，也不显著，有鞭毛，能运动。生长温度最高位45-55°C,最低为5-20°Co抱子耐热性强。好氧发酵主要用于污水
2、处理、有机肥发酵、及其他工业生产。好氧发酵作用大反映相比厌氧发酵速度快但需要通气。实验目的本实验是在生物工艺学基础上模拟工业好氧发酵过程，验证模拟过程中的糖量、菌体浓度、PH的变化，熟悉好氧菌的发酵过程。(1)了解好氧发酵的工艺流程。(2)熟悉各个参数测量的方法原理。(3)分析过程岀现的问题。三、实验原理及步骤3.1培养基配制3.1.1原理培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及生长素和水等。有的培养基还含有抗菌素、色素、激素和血清本实验采用的是纳豆mb，纳豆菌属于细菌。一般采用葡萄糖
3、蛋白籐液体培养基用于种子培养和发酵培养。其中葡萄糖为主要碳源，蛋白月东为氮源，酵母膏、NaCI,KH2PO4,K2HPO4作为无机盐，为微生物提供钾，磷，镁，钠离子等。培养基配好后，用稀酸或稀碱将pH调至所需酸碱度或自然pH。3.1.2仪器与设备三角烧瓶，烧杯，玻璃棒，分析天平，牛角匙，pH计，高压蒸汽灭菌锅，废报纸，纱布和麻绳等。3.1.3培养基配方种子培养基配制培养基配方如下：葡萄糖0.5g蛋白籐0.5g酵母膏0.25g水50mlpH7.0发酵培养基配制培养基配方如下：葡萄糖30g蛋白腺7.5gNaCI7.5gK2HPO46gKH2PO43g水1500mlpH
4、7.04操作步骤称量熔化调pH分装：发酵培养基分装15瓶250ml三角烧瓶，每瓶100mlo生物工程专业设计（综合）实验包扎灭菌：将上述培养基以O.IMPa,115°C,30min高温蒸汽灭菌。3.2好氧发酵培养3.2.1原理把好氧微生物接种到其相应的培养基上通入无菌的压缩空气或者接触空气在合适的温度、pH值等条件下进行发酵。3.2.2仪器与设备移液枪，无菌接种室，酒精灯，酒精，棉花，恒温振荡箱等。3.2.3培养操作步骤1）种子培养挑取2ml纳豆菌菌种，接种到50ml种子培养基（250ml三角瓶）中于30°C、150r/min条件下摇数培养24ho发酵培养将种子培
5、养液以2%（2ml）的接种量接入100ml发酵培养基（250ml三角瓶）中于309、150r/min摇数培养48h。前24h每4h取样测定，后24h每2h测定一次，记录数据。测定内容：生长曲线，pH,残糖。3.3培养液pH测定pH值是水溶液中氢离子活度的表示方法。溶液的pH值使用度计测定。水溶液的pH值通常以玻璃电极为指示电极、饱和甘汞电极为参比电极进行测定。3.3.1原理pH值定义为氢离子活度的负对数，即pH=-logaH+,但氢离子活度却难以由实验准确测定。在实际工作中，pH值按下式测定：pH=pHs+（E-Es）/k式中：E为含有待测溶液（pH）的原电池电动
6、势（伏）；Es为含有标准缓冲液（pHs）的原电池电动势（伏）；k为与温度（t）有关的常数［k=0.05916+0.000198（t-25°C）］o3.3.2仪器与设备烧杯，pH计等。3.3.3操作步骤1）打开pH计开关，使用前先将pH计探头放入装有清水的烧杯中润洗，取出。1）将pH计探头放入刚从培养箱中取岀的培养液中，记录pH计上的pH数值。2）将pH计探头再次放入装有清水的烧杯中润洗。3.3.4注意事项pH计探头要轻拿轻放。pH计探头要润洗。使用完后要及时关掉。3.4微生物生长曲线测定3.4.1原理将一定量的细菌转入新鲜培养液中，在适宜的培养条件下细胞要经历延迟
7、期、对数期、稳定期、衰亡期4个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。3.4.2仪器与设备移液管，试管，试管架，分光光度计等。3.4.3操作步骤比浊测定用自来水作为空白对照，选用600nm波长进行光电比浊测定。以培养液测定，对细胞浓度密度大的培养液适当稀释后测定，使其光密度值在0.1〜0.65之生物工程专业设计（综合）实验分别在培养0,4,8,12,16,20,24,28,32,36,38,40,42,44,46和48h时，取出培养液按上述方法操作测定OD值。四、实验数据五、小结通过本次实验进一步了解了纳豆菌，
8、熟悉了培养
