hplc测定酚类化合物实验报告

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1、实验题目：液相色谱测定酚类化合物实验报告环境工程刘鹏12333511.实验目的（1）了解仪器各部分的构造和功能及分析的原理（2）掌握样品、流动相的处理、仪器的维护等基木知识（3）学会简单样品的分析操作过程（4）掌握HPLC分析的定性、定量方法2.基本原理高效液相色谱仪以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体Z间的性质差别。与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的

2、限制，可以弥补气相色谱法的不足。对于酚类化合物的测定，其基本原理是这样的：先用固相小柱吸附水中酚类化合物，然后用溶剂洗脱，经氮吹气浓缩至一定体积后，用反相高压液相色谱法分析。在反相色谱柱上以甲醇/（水+乙酸）为流动相把经预处理的酚类化合物分离，用二极阵列检测器或紫外检测器，测定各种酚的峰高或峰面积，以外标法定量。3.仪器与试剂3・1仪器：高效液相色谱仪：可编程紫外检测器微量注射器：5011L、100UL色谱柱：C18或C8柱化学工作站尖底浓缩瓶:10ml具刻度富集柱3・2试剂：流动相：甲醇/高纯水（

3、需①0.22um滤膜过滤）标准物：六种酚类混合物洗脱液：正己烷、四氢U夫喃（需重蒸）硫酸冰醋酸无水亚硫酸钠4.所用仪器的主要组件（1）高压输液泵V主要部件之一，压力:150X105〜350X105Pa。V为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（＜10um）,液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点Z-o▼应具冇压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。（2）梯度淋洗装置外梯度（高压梯度）：用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进

4、入色谱柱。内梯度（低压梯度）：一台高压泵，通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵屮混合。（3）进样装置流路屮为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置。（4）高效分离柱柱体为直形不锈钢管，内径1〜6mm,柱长5〜40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。(5)液相色谱检测器I紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高，线形范围宽；流通池可做得很小(ImmXIOmm,容积8uL)；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长口J选，易于操作；口J用于梯

5、度洗脱。II光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器:1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立休谱图。III示差折光检测器除紫外检测器之外应用最多的检测器。可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度成止比。IV荧光检测器高灵敏度，高选择性。对多环芳坯，维生素B、黄曲霉素、吓咻类化合物、农药、药物、氨基酸、笛类化合物等有响应。1.数据处理(1)原始数据标准样品数据浓度(ppm)保留时间(min)峰而积峰高峰宽25.31423.82.20.159845.32144

6、.64.60.148165.33771.670.155885.33393.69.30.1537(2)数据处理①根据标准样品的实验数据，做岀峰面积随浓度变化的标准曲线。2,4-二氯苯酚预期保留时问：5.333DADIF,Sig=295z16Ref=360,100相关性：0.99936残留标准误差：1.53250公式：y=mx+bm:11.74987b:-2.70787e-lx:含量y：峰高②根据标准曲线，计算实际单标屮的物质浓度单标为8ppm的标样物质实你浓度：C=7.990ppm