hgh质量检定实验

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1、M123123(A)(B)图1.rHGH表达SDS-PAGE及Western-Blotting图(A)：SDS-PAGE胶(B)：Westernblotting膜产品质量研究对TrHGH产品的质量研究贯穿整个实验室研究、屮试研究过程，并对工艺各阶段进行严格的质量控制，确保产品的高质量。对中试产品的质量控制分两方面进行：1・半成品/成品的质量控制；2.成品的质量控制。均严格按照《屮国生物制品检定规程》（2000版）屮各相关规定与程序进行。一.产品质量研究1.半成品质量检定1.1免疫印迹试验：用鼠抗人的HGH单克隆抗体（NE

2、0MARKERS公司）对rHGH进行WesternBlot分析。结果见图1,rHGH显示强阳性。97kD66kD43kD31kD20kD14kDM:Marker；1.2.3HGH原液冻干品1.2紫外光谱扫描：根据《中国生物制品检定规程》（2000版）中“紫外光谱测定,啲具体方法进M123123(A)(B)图1.rHGH表达SDS-PAGE及Western-Blotting图(A)：SDS-PAGE胶(B)：Westernblotting膜产品质量研究对TrHGH产品的质量研究贯穿整个实验室研究、屮试研究过程，并对工艺各阶

3、段进行严格的质量控制，确保产品的高质量。对中试产品的质量控制分两方面进行：1・半成品/成品的质量控制；2.成品的质量控制。均严格按照《屮国生物制品检定规程》（2000版）屮各相关规定与程序进行。一.产品质量研究1.半成品质量检定1.1免疫印迹试验：用鼠抗人的HGH单克隆抗体（NE0MARKERS公司）对rHGH进行WesternBlot分析。结果见图1,rHGH显示强阳性。97kD66kD43kD31kD20kD14kDM:Marker；1.2.3HGH原液冻干品1.2紫外光谱扫描：根据《中国生物制品检定规程》（2000

4、版）中“紫外光谱测定,啲具体方法进行。将纯化样品用生理盐水稀释到0.5mg/ml,加入lcm石英吸收池内，在220-300nm波长范围内扫描样品。Wavelength[nm]图2-1批号rHGH扫描图Wavelength[nm]图2-2:20020902批号rHGH半成品扫描图同时还扫描另外2个批号半成品，特征波长如下：样品特征峰波长nm吸光值200209012790.42417200209022790.41222200209032790.43200可见，本产品蛋白质特征峰在277±3nm范围内1.3纯度及分子量检测a.

5、SDS-PAGE电泳：用非还原型SDS-PAGE法检测样品的纯度，还原型SDS-PAGE法检测样品的分子量，将待检样品加上样品缓冲液，加热5分钟，上样，使加样量不低T5Mg（银染法）或10憾（考马氏亮蓝R-250染色法），经PharmaciaVDS扫描分析。ab'c'ab''c，图3—1.半成品还原、非还原SDS-PAGE电泳a.Markerb.2012011批号rHGH述原处理c.2012011批号rHGH非还原处理b'.2012012批号rHGH还原处理c'2012012批号rHGH非还原处理b''2012017批号

6、rHGH还原处理2012017批号rHGH非述原处理扫描结果如下：样品名称主带扫描面积％分子量(Da)201210119&5220152012101297.9222042012101799.522125可见，半成品迁移位置一致，连续3批半成品扫描纯度达到95%以上，连续3批半成品分子量为22125土205.92,说明用非述原电泳检测蛋白纯度和用述原电泳检测蛋白分子量方法可信。b.分子量检测：(质谱法)使用对照品(SaizenHGH),加250)11无菌PBS溶解成lOOgg/ml,10ul分装。将对照品与样品做质谱检测，

7、分子量均为22125Do图3—2对照品质谱图Co-pomnc,went1t/S/20023iS2i21PMP仔1<图3-3批号20031027样品质谱图c.HPLC纯度分析：在方法建立之时，我们采用SaizenHGH对照品做对照，同时以原液缓冲体系做基线。具休方法如下：色谱条件色谱主机厂家与型号：Waters600486色谱柱厂家与规格：WatersC183.9x300mm流动相:A:10%乙氧+0.1%TFAB:乙氤+0.1%TFA梯度：timeflowA%B%01100025120803012080331010035

8、11000流速：1.0ml/min样品上样浓度：标示量为0.5mg/瓶，加纯化水溶解成lmg/ml样品上样量：20ul检测波长：280nm结果如图：样品纯度97%0060QWOQ0302Q0200010QOOO0002004.0060080010.00120014.00160018003).002200KOO£002