碘标记直肠癌相关抗原单克隆抗体的免疫显像研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果碘标记直肠癌相关抗原单克隆抗体的免疫显像研究提要：采用非放射碘标记人直肠癌相关抗原单克隆抗体进行肿瘤的免疫组化鉴定与免疫显像研究。应用本室制备的人直肠癌细胞相关抗原McAb，采用氯胺T法进行碘标记。经SephadexG-10柱层析纯化，并进行免疫荧光鉴定及CT显像研究。直肠癌细胞与碘标记直肠癌单克隆抗体免疫结合后，在荧光显微镜下直肠癌细胞膜上出现鲜艳的桔黄色荧光，经CT

2、扫描发现有阻挡X线作用，比对照管密度高出44HU，注入小鼠肝脏后，可见肝内有密度升高处，较正常肝组织高出14HU，能特异地标识出直肠癌细胞部位。结果提示：非放射碘标记人直肠癌相关抗原McAb可用于人直肠癌的免疫学诊断与生物导向CT显像研究。关键词：直肠癌；单克隆抗体；免疫组织化学；碘化钠；肛肠病放射免疫显像在医学研究中得到广泛应用，但RII存在同位素半衰期短、污染环境、需要专门配备ν照相机或ECT机等不足，为弥补RII的缺点，开发非放射碘的应用领域，进行了本项研究。1　材料　人直肠癌相关抗原McAb和

3、人直肠癌细胞株，由本实验室制备。FITC-羊抗小鼠IgG,由军事医学科学课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果院微生物流行病研究所提供。碘化钠溶液：碘化钠，加/L磷酸盐缓冲液：偏理业硫酸钠，加/L磷酸盐缓冲液至100ml。SephadexG-10和透析袋分别由Sweden和Sigma公司提供。二氧

4、化碳培养箱，倒置显微镜，洁净工作台，低温离心机，蛋白柱层析紫外检测仪，BSZ-160自动收集仪，放射荧光显微镜。　方法　人直肠癌细胞的制备：取直肠癌标本分离细胞，在RPMI1640培养液中传代，1:1胰酶和EDTA消化，无血清1640制备细胞悬液，离心弃上清，加生理盐水，配成细胞悬液。　HM93-4McAb细胞株的制备［1］：取人直肠癌细胞免疫BaIb/c小鼠，取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合，经筛选鉴定获得特异性较强的能稳定分泌McAb的细胞株。　HM93-4McAb与直肠癌细胞间接免疫荧光试验［2

5、，3］：取直肠癌细胞1×106/ml加入HM93-4McAb，37℃30min，用/的PBS洗涤3次，去上清后加入PBS至，取滴载玻片上，用盖玻片加无荧光甘油封片在荧光显微镜下观测，结果照相。　碘标记HM93-4McAb100μl，再加入NaI溶液，震荡混匀后，各加氯胺T溶液100μl(10g/L,新鲜配制)，反应1min后，加入偏重亚硫酸钠溶液10μl终止反应，然后加入10%KI溶液1～2滴，无黄色出现，表示反应终止完全，将此样品进行纯化。　I-McAb的分离与纯化：取sephadex课题份量和难易

6、程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果G-10g,蒸馏水浸泡过夜后，洗数次后装注，观察柱内无断层、无气泡后，用//LPBS()平衡，连接蛋白质紫外检测仪，波长280nm。先通过牛血清蛋白溶液以封闭凝胶可能与蛋白质产生吸附的活性部位，待检测仪数字下降至0时，再加入I-McAb样品液，并用缓冲液洗脱，分段收集，每管

7、1ml；将峰1收集液装入透析袋，聚乙二醇10倍浓缩，PBS透析。为1次制备量，制备5次混合待鉴定与实验用。　I-McAb与直肠癌细胞间接免疫荧光试验：试验管与对照管同时进行IFAT，方法同［6］。　I-McAb与直肠癌细胞结合后对X线的阻挡情况：取试管4只，管1加入未经碘标记McAb溶液，管3加入McAb与直肠癌细胞免疫结合后的细胞悬液(1×106/ml），管4加入I-McAb与直肠癌细胞免疫结合后的细胞悬液，将4管同置一试管架上，作CT扫描。　动物实验鉴定：取小鼠2只，在1号鼠肝内注射I-McAb与

8、直肠癌细胞结合的细胞悬液(1×108/ml),2号鼠肝内注射直肠癌细胞悬液(1×108/ml)。将2只小鼠背靠背排列固定，CT扫描，观察结果。　结果.1　I-McAb直肠癌细胞免疫荧光试验　在荧光显微镜下实验管直肠癌细胞膜上出现鲜艳的桔黄色，对照管在荧光显微镜下出现黄绿色荧光。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课