环孢素ａ对阿霉素治疗肝癌影响的实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果环孢素Ａ对阿霉素治疗肝癌影响的实验研究作者：张俊峰，陈规划，陆敏强，李华，蔡常洁，杨扬，陈伟【摘要】　　目的探讨环孢素Ａ(CyclosporineA,CsA)对阿霉素治疗肝癌的影响。方法培养HepG2肝癌细胞，分成对照、CsA、ADM、CsA+ADM组，分别处理24～48h，采用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡。结果肝癌细胞增殖能力48h明显受到抑制，CsA在5～1000μｇ/L随浓度增加,凋亡率逐渐增加，超过该浓度时,则

2、出现凋亡率减低。CsA、及ADM均使G2期显著延长；CsA对HepG2肝癌细胞有促进细胞凋亡作用，与ADM有协同促调亡作用。结论环孢素Ａ对肝癌增殖有抑制作用,使Ｇ2期阻滞,促凋亡。环孢素Ａ联合阿霉素对肝癌治疗有协同作用。【关键词】肝细胞癌　环孢菌素　阿霉素；细胞增殖InfluenceofCombinedCyclosporineAwithADMonHepatocellularCarcinomaKeywords：Humanhepatocellularcarcinomacellline;CyclosporineA;Adriamycin;Cellproliferation　环孢素Ａ(

3、CsA)为目前课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果肝移植术后基本抗免疫排斥药。阿霉素为肝癌常用的有效化疗药物，CsA等免疫抑制剂与阿霉素联合应用是否会增加肝癌复发一直困扰着移植外科医师。我们对此进行了深入研究，探讨其对肝癌肝移植术后应用的安全性。1材料与方法材料DNA细胞周期及细胞凋亡流式细胞检测试剂盒、环孢素Ａ(CsA)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)。荧光定量仪PE000全

4、自动荧光定量PCR仪购于美国PerkinElmer公司;流式细胞仪购于BD公司。细胞培养人肝癌细胞HepG2购自中山大学细胞库，常规培养于DMEM完全培养液内(含10%小牛血清、100μｇ/ml青霉素和100μｇ/ml链霉素，)，置37℃及5%CO2孵箱中培养，选对数生长期的细胞用于实验。实验分组CsA设为5、10、100、500、1000、5000μｇ/L，ADM设为1000μｇ/L，分成对照、CsA、ADM、CsA+ADM组。HepG2细胞分别经过24、48h处理后检测。MTT比色法实验取96孔细胞培养板加入相同数目细胞,培养24h,细胞贴壁,分别将FK506、CsA处

5、理的相同数目细胞加入各个孔，同时设3个复孔，分别置于37℃、5%CO2孵箱中培养24h、4h后，然后每孔加入15μl课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果MTT染液，在37℃、5%CO2孵箱中培养4～h，每孔加入10%SDS的盐酸溶液，再置孵箱中培养过夜，最后在酶联检测仪波长570nm测OD值。流式细胞术检测细胞凋亡以%胰蛋白酶消化后，锥虫蓝拒染法计数细胞，使收集细胞总数为

6、1×106以上，100ｒ/min离心5min后，弃上清，转入Eppendorf管内，加入冰PBS()缓冲液，100ｒ/min离心5min后，再洗1次，弃上清，缓慢加入20℃预冷的70%乙醇，固定细胞，充分震荡，使细胞分散，加入碘化丙啶(PI)和AnnexinVFITC种染料，各5μl，4℃保存15min后，放入流式细胞仪的样品室，采用488nm氩离子激光进行检测。流式细胞术检测细胞周期同上收集2×105～1×106细胞，75%冷乙醇固定10min。RNA酶消化，加碘化丙啶染液，4℃避光静置15min。用流式细胞仪进行检测。统计学方法采用Excel软件中的方差分析和ｔ检验进行

7、统计学处理，以α=作为检验标准。2结果.1经CsA处理24h的肝癌细胞OD值较对照组无明显变化，作用48h后OD值较对照组明显降低，表明经CsA处理48h的肝癌细胞增殖能力明显受到抑制，见表1。表1不同浓度CsA对HepG2肝癌细胞*：与对照组比较P.3CsA在200μｇ/L时对HepG2肝癌细胞作用48h影响与对照组比较，CsA使课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价