江苏省建湖地区肠出血性大肠杆菌o157∶h7监测分析

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果江苏省建湖地区肠出血性大肠杆菌O157∶H7监测分析【摘要】目的了解建湖地区腹泻患者肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染情况，家禽、家畜O157∶H7带菌情况，水源水中O157∶H7污染情况。方法在XX年5月—9月采集腹泻患者和家禽、家畜的粪便以及水源水、肉制品、苍蝇等标本计836份，应用免疫磁珠浓集、山梨醇麦康凯琼脂分离、生化和血清学反应进行鉴定。结果共检出肠出血性大肠杆菌O157∶H阳性标本17份，其中腹泻患者

2、阳性率为%，4种动物粪便、肉制品均检出阳性标本，但水、苍蝇标本中均未检出阳性。菌株对青霉素耐药性最高，达100%，对其他受试抗生素均敏感。结论该地区腹泻患者和家禽、家畜中存在肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染，且具潜在的流行性危险。【关键词】大肠杆菌O157∶H7；免疫磁珠分离法；监测；分析O157∶H7是肠出血性大肠杆菌的一个主要血清型，主要引起人的食源性疾病，以突发性腹痛、水样便、血痢为主要症状，发热或不发热，严重时呈出血性肠炎甚至溶血性尿毒综合征。近20余年来，该菌引发的食物中毒在世界各地都有不同规模的暴发流行，我国自1987年在江苏徐州

3、市检出首例E.coliO157∶H7以来，许多地区都开展了相关的监测工作。建湖县位于苏中、苏北交汇处，为了解E.coli课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果O157∶H7在该县腹泻患者及家畜、家禽中的感染情况，我们采用免疫磁珠分离法集菌后分离，E.coliO157∶H7血清凝集阳性的菌株做生化鉴定和药敏试验，现报告如下。1材料和方法标本来

4、源008年5月至9月，采集建湖县、镇各级医院肠道门诊腹泻患者和当地养殖场动物粪便；采集腹泻患者家中的苍蝇5份，每份10只；采集鲜肉或熟肉制品250g置于消毒封口袋内；无菌采集建湖县内30个自来水厂水源水152份，各500ml。实验材料1．2．1试剂来源Dynabead抗O157免疫磁珠(挪威Dynal公司)、科玛嘉(CHROMagar)O157显色琼脂、头孢拉定(C)、新生霉素(S)、亚碲酸钾(T)、mEC培养基、山梨醇麦康凯琼脂(SMAC),大肠埃希菌E.coliO157诊断血清、H7血清(兰州生物制品研究所)、大肠埃希菌E.coliO157

5、指示菌等均由江苏省CDC微生物检验室提供。生化微量鉴定管、M-H药敏琼脂、M-H药敏肉汤、药敏纸片均由杭州天和微生物试剂有限公司提供。所有试剂均在有效期内使用。O157显色培养基由郑州生物制品有限公司提供。试剂配制10%新生霉素mEC增菌液1gmEC增菌培养基，加1000ml重蒸溜水，摇匀溶解后，50ml分装于100课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须

6、有创新性的成果ml三角烧瓶中，121℃高压灭菌1min后加10%新生霉素10μl。CT-SMAC平板0gSMAC加1000ml重蒸溜水摇匀，100℃水浴煮沸分装。115℃高压灭菌1min，冷却至55℃左右时，加入50μl1mg/L头孢拉定和50μlg/L亚碲酸钾，摇匀后浇平板。细菌洗涤缓冲液（PBS-Tween20)PBS加入Tween20，终浓度为%，115℃高压灭菌1min。检验方法mEC增菌取腹泻患者和压碎的家畜、家禽粪样g，无菌条件下解剖的苍蝇10只，无菌条件下取2g肉制品剪碎，分别接种到50ml10%新生霉素mEC增菌液中，400ml

7、水样接种到100ml倍浓缩的上述增菌液中摇匀，放37℃恒温摇床振荡培养h。IMS富集先将悬浮的E.coliO157免疫磁珠分装到的灭菌EP管中。轻轻摇动，使增菌物与磁珠充分混匀。30min后，把EP管插到装有磁板的DynalMPC-M架上，不断缓缓翻转支架作用10min。吸去悬浮液。取下磁板，每支EP管加入1ml洗涤液，盖上盖，缓慢翻转10min，洗涤2次后，吸去洗液，最后用少量洗液重新悬浮富集了的磁珠。分离鉴定上述悬浮液充分混匀，分涂于2块CT-SMAC平板，37℃培养18～2h，挑取中等大小不发酵山梨醇的无色半透明的菌落，点种到科玛嘉E.c

8、oli课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济