江苏省建湖地区肠出血性大肠杆菌o157∶h7监测

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1、江苏省建湖地区肠出血性大肠杆菌O157∶H7监测【摘要】目的了解建湖地区腹泻患者肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染情况，家禽、家畜O157∶H7带菌情况，水源水中O157∶H7污染情况。方法在2008年5月—9月采集腹泻患者和家禽、家畜的粪便以及水源水、肉制品、苍蝇等标本计836份，应用免疫磁珠浓集、山梨醇麦康凯琼脂（SMAC）分离、生化和血清学反应进行鉴定。结果共检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7阳性标本17份，其中腹泻患者阳性率为1.15%，4种动物粪便、肉制品均检出阳性标本，但水、苍蝇标本中均未检出阳性。菌株对青霉素耐药性最高，达100%，对其他受试抗生

2、素均敏感。结论该地区腹泻患者和家禽、家畜中存在肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染，且具潜在的流行性危险。【关键词】大肠杆菌O157∶H7；免疫磁珠分离法；监测；分析O157∶H7是肠出血性大肠杆菌（enterohe-morrhagicEscherichiacoli,EHEC）的一个主要血清型，主要引起人的食源性疾病，以突发性腹痛、水样便、血痢为主要症状，发热或不发热，严重时呈出血性肠炎甚至溶血性尿毒综合征。近20余年来，该菌引发的食物中毒在世界各地都有不同规模的暴发流行，我国自1987年在江苏徐州市检出首例E.coliO157∶H7以来，许多地区都开展了相关的

3、监测工作。建湖县位于苏中、苏北交汇处，为了解E.coliO157∶H7在该县腹泻患者及家畜、家禽中的感染情况，我们采用免疫磁珠分离法（IMS）集菌后分离，E.coliO157∶H7血清凝集阳性的菌株做生化鉴定和药敏试验，现报告如下。1材料和方法1.1标本2008年5月至9月，采集建湖县、镇各级医院肠道门诊腹泻患者和当地养殖场动物粪便（每份不少于5g，2h内4℃冷藏送检）；采集腹泻患者家中的苍蝇5份，每份10只；采集鲜肉或熟肉制品250g置于消毒封口袋内；无菌采集建湖县内30个自来水厂水源水152份，各500ml。1.2实验材料1．2．1试剂Dynabead抗E

4、.coliO157免疫磁珠(挪威DynalA.S公司)、科玛嘉(CHROMagar)O157显色琼脂、头孢拉定(C)、新生霉素(S)、亚碲酸钾(T)、mEC培养基、山梨醇麦康凯琼脂(SMAC),大肠埃希菌E.coliO157诊断血清、H7血清(兰州生物制品研究所)、大肠埃希菌E.coliO157指示菌等均由江苏省CDC微生物检验室提供。生化微量鉴定管、M-H药敏琼脂、M-H药敏肉汤、药敏纸片均由杭州天和微生物试剂有限公司提供。所有试剂均在有效期内使用。O157显色培养基由郑州生物制品有限公司提供。1.2.2试剂配制1.2.2.110%新生霉素mEC增菌液41g

5、mEC增菌培养基，加1000ml重蒸溜水，摇匀溶解后，50ml分装于100ml三角烧瓶中，121℃高压灭菌15min后加10%新生霉素10μl。1.2.2.2CT-SMAC平板50gSMAC加1000ml重蒸溜水摇匀，100℃水浴煮沸分装。115℃高压灭菌15min，冷却至55℃左右时，加入50μl1mg/L头孢拉定和50μl5g/L亚碲酸钾，摇匀后浇平板。1.2.2.3细菌洗涤缓冲液（PBS-Tin。1.3检验方法1.3.1mEC增菌取腹泻患者和压碎的家畜、家禽粪样5g，无菌条件下解剖的苍蝇10只，无菌条件下取25g肉制品剪碎，分别接种到50ml10%新生霉

6、素mEC增菌液中，400ml水样接种到100ml5倍浓缩的上述增菌液中摇匀，放37℃恒温摇床振荡培养6h。1.3.2IMS富集先将悬浮的E.coliO157免疫磁珠分装到1.5ml的灭菌EP管中。轻轻摇动，使增菌物与磁珠充分混匀。30min后，把EP管插到装有磁板的DynalMPC-M架上，不断缓缓翻转支架作用10min。吸去悬浮液。取下磁板，每支EP管加入1mlpH7.4PBS-Tin，洗涤2次后，吸去洗液，最后用少量洗液重新悬浮富集了的磁珠。1.3.3分离鉴定上述悬浮液充分混匀，分涂于2块CT-SMAC平板，37℃培养18～24h，挑取中等大小不发酵山梨醇

7、的无色半透明的菌落，点种到科玛嘉E.coliO157平板上，37℃培养18～24h后，挑取紫红或微红菌落作革兰染色、血清凝集，阳性菌株作系统生化和药敏试验。1.3.4菌株确认分离的菌株经形态染色、系统生化和血清学鉴定后送江苏省疾控中心微检室确认，可疑者剔除。1.3.5药敏试验用Z-Co的敏感性不足30%，青霉素则100%耐药。3讨论肠杆菌E.coliO157∶H7快速、敏感的检测方法较多，免疫磁珠分离法是用特异性抗体包被在磁珠表面，来捕获检样中的E.coliO157，提高检测的灵敏度和阳性检出率。本监测显示，建湖地区腹泻患者和4种动物宿主的粪便中均检出E.co

8、liO157∶H7，4种动物宿主的总感