梅花鹿鹿茸、鹿托盘及鹿骨水溶性总蛋白比较研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果梅花鹿鹿茸、鹿托盘及鹿骨水溶性总蛋白比较研究作者：唐任能，赵雨，孙晓迪，曲晓波【摘要】目的：比较鹿茸、鹿托盘、鹿骨水溶性总蛋白差异。方法：采用SDS聚丙烯酰铵凝胶电泳和BCATM蛋白含量测定法比较鹿茸、鹿托盘、鹿骨水溶性总蛋白差异。结果：鹿茸水溶性总蛋白、鹿托盘水溶性总蛋白和鹿骨水溶性总蛋白的相对含量及组成差异极其明显，SDS聚丙烯酰铵凝胶电泳法及BCATM蛋白含量测定法是鉴别鹿茸、鹿托盘及鹿骨有效方法。结论：本研究对鉴别鹿茸、鹿托盘、鹿骨粉具有一定

2、的意义。【关键词】鹿茸;鹿托盘;鹿骨;水溶性总蛋白质1材料仪器材料梅花鹿茸、鹿托盘和鹿骨均由吉林东丰药业提供。低分子量标准蛋白质，购于中国科学院上海生物化学研究所；BCATM(二辛可宁酸或二羧基喹啉)蛋白浓度试剂盒，购于美国Pierce公司；其他试剂均为分析纯。仪器HetoLL3000型冻干机，瑞典JounaNordic公司；电泳仪，北京六一仪器厂；垂直板电泳槽，北京六一仪器厂；高速离心机，Eppendorf公司。实验方法.1总蛋白的提取课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一

3、定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果取等量干品鹿茸、鹿托盘和鹿骨用车床机粉粹成细粉(120目)即可。分别取鹿茸粉,鹿托盘粉，鹿骨粉100g，用20mMTrisHCl(含molNaCl、1mmolEDTA、1mmolPMSF)缓冲液浸提(4℃×2h),离心(10020rpm×min),即得上清;沉淀用上述缓冲液反复浸提3次,离心(1000rpm×min),合并上清,用80%硫酸铵沉淀,静置(4℃×2h),离心(1000rpm×min)，将沉淀用蒸馏水透析，冻干即得鹿茸水溶性总蛋白，鹿托盘水溶性总蛋白和鹿骨水溶性总蛋白粗品。.2

4、蛋白含量测定使用PIERCE公司生产的BCATM蛋白试剂盒测定浓度。.3SDS聚丙烯酰铵凝胶电泳按文献方法［2］，采用溶度为10%的分离胶和溶度为5%的溶缩胶,溶缩胶电压为70mV，分离胶电压为140mV。采用考马斯亮蓝R250进行染色,最后用脱色液(甲醇∶冰醋酸∶蒸馏水=∶∶1)脱色,至背景清楚，观测分子量范围。结果.1梅花鹿鹿茸、鹿托盘及鹿骨水溶性总蛋白含量测定各取100g梅花鹿鹿茸粉、鹿托盘粉及鹿骨粉得到水溶性蛋白粗品分别为、g、g,使用PIERCE公司生产的BCATM蛋白试剂盒测定浓度,粗品蛋白中蛋白含量分别为93%、88%、73%。.2SDSPAGE电泳课题份量和难易程

5、度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果可见鹿茸水溶性总蛋白明显可见有8条带,其分子量大约分别为110KD、100KD、66KD、51KD、43KD、35KD、30KD、14KD。从带上看，含量最高的是分子量为66KD的蛋白;其次分子量为14KD的蛋白。鹿托盘水溶性总蛋白明显可见有11条带,其分子量大约分别为110KD、100KD、66KD、51KD、4KD、30KD、23KD、17KD、16KD、

6、14KD,10KD。从带上看,含量最高的是分子量为66KD的蛋白;其次分子量为51KD的蛋白。鹿骨水溶性总蛋白几乎无明显可见的蛋白带(见表1)。讨论目前，对鹿茸、鹿托盘、鹿骨临床疗效物质作用基础研究较少，特别是对于鹿茸、鹿托盘、鹿骨中大分子进行评价，为临床应用提供表1鹿茸、鹿托盘和鹿骨的蛋白谱带分布相对分子量10KD14K16KD17KD23KD30KD35KD43KD51KD66KD100KD110KD鹿茸MWWWWSWW鹿托盘WWWWWWWMSWW鹿骨[11]W注：S:strong;M:medium;W:weak。蛋白质研究几乎没有文献课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出

7、结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果报道。蛋白质是生命的物质基础，每一种蛋白质都有特定的生物学功能［3］。经SDS聚丙烯酰铵凝胶电泳比较鹿茸、鹿托盘、鹿骨蛋白差异发现：鹿骨里几乎无明显可见的蛋白谱带，鹿托盘具有与鹿茸相同的７条蛋白带，其分子量分别约为110KD，100KD，66KD