六神丸血浆药物化学的研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果六神丸血浆药物化学的研究　　六神丸是一种拥有100多年历史，享誉国内外的著名中成药。六神丸由六味药材配置而成，包括牛黄、珍珠、蟾酥、明雄黄、麝香、冰片。其具有清热解毒、消肿止痛的作用[1，2]，应用于咽喉肿痛、痈疡疔疮等。现代中药开发中，将六神丸应用于更多疾病，如消炎、镇痛、抗肝癌、抗肿瘤等[3～6]。对于六神丸成分的分析，曹阳等有相关报道[7～9]。本文基于对六神丸HPLC图谱的分析，旨在建立方法，从而为探究六神丸有效成分及其作用机制奠定基础。　

2、　目前对于中药复方六神丸的有效成分研究过于分散而缺乏系统性，仍不能明确有效的物质基础。中药血浆药物化学以中药口服后含药血浆为对象，综合应用多种现代技术，分析鉴定含药血浆中的移行成分，包括中药原型成分及其代谢产物，以研究中药在体内发挥作用物质课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果[11]。药物无论经过何种代谢必须由给药部位进入血液循环，以血液为介质输出到靶点，从而产生作用，中药

3、亦是如此。药物进入血液可能是其原形化合物，也可能是其代谢产物，还有可能是机体应激产生的活性物质发挥药效[12～15]。本实验通过对比分析空白血漿、体内六神丸血浆、体外六神丸血浆、体内标准品血浆以及体外标准品血浆的HPLC-UV图谱，研究六神丸进入血液后的原形药物及其代谢成分的变化状况。以此逆向追溯六神丸药效活性物质群，有助于建立六神丸基于生物效应的品质评价指标。　　2材料与试剂　　仪器　　仪器选用分析型高效液相色谱仪　　试剂　　试剂包括：六神丸，5-羟色胺盐酸，华蟾毒它灵，蟾毒它灵，蟾毒灵，华蟾酥毒基，酯蟾毒配基。乙腈为色谱纯，乙酸乙酯，其他试剂均为分析纯。　　动物　　健康雄性S

4、D大鼠，体重220g左右[湖北省实验动物研究中心，许可证号：SCXKXX-0018]。动物实验员操作证号：TYXX0044。　　3方法　　六神丸灌胃药液及标准品灌胃药液的制备　　将六神丸研磨成粉，称取一定量六神丸粉末，配制成mg/mL的水溶药液，超声30min，使其充分溶解，于℃冰箱保存，备用。　　将华蟾酥毒基、酯蟾毒配基、蟾毒灵、蟾毒它灵、华蟾毒它灵配制成1mg/mL的水溶液，超声30min，使其充分溶解，于℃冰箱保存，备用。　　体内六神丸血浆样品和空白血浆样品的制备课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。

5、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果　　空白血浆的制备：健康SD大鼠4只，禁食1h，灌胃生理盐水，在1h后，将每只大鼠摘眼球取血，各mL以上，置于含肝素钠抗凝剂的离心管内，备用。　　体内六神丸血浆样品制备：健康SD大鼠3只，禁食1h，灌胃六神丸水溶液约1mL，给药1h后，每只大鼠摘眼球取血mL以上，置于含肝素钠抗凝剂的离心管内，制备3份样品备用。　　取以上制备的样品各mL，加入2mL乙酸乙酯，漩涡混悬30s，3000r/min离心min，取上清液；将沉淀再加2mL乙酸乙酯，旋窝混悬3

6、0s，3000r/min离心min，取上清液。合并两次上清，挥干溶剂，在进样前加入300μL甲醇，使充分溶解后，用μm的滤头过滤备用。　　体外六神丸血浆样品的处理　　为减小药物与血液样品处理方法不同所带来的误差，取节条件下制备的六神丸灌胃液1mL和mL空白血浆混合，漩涡混悬30s，静置1h，按照血浆样品处理方法进行预处理，平行制备3份样品备用。　　不同时间点含药血浆样品的处理　　健康SD大鼠15只，禁食1h，分成、1、3、6、2h五组，每组三只大鼠，每组大鼠灌胃六神丸水溶液一次，约1mL，在给药后、1、3、6、2h的时间点，每组大鼠摘眼球取血mL以上，联盟置于含肝素钠抗凝剂的离心

7、管内。每份样品取血浆mL，加2mL乙酸乙酯，漩涡混悬30s，3000课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果r/min离心min，取上清液；将沉淀再加2mL乙酸乙酯，旋窝混悬30s，3000r/min离心min，取上清液。合并两次上清，挥干溶剂，在进样前加入300μL甲醇，使充