实验九酶基本性质

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1、实验九酶的基本性质一、目的酶是生物催化剂，是具有催化功能的蛋白质，生物体内的化学反应基本上都是在酶催化下进行的。通过本实验了解酶催化的高效性、特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。二、原理过氧化氢酶广泛分布于生物体内，能将代谢中产生的有害的H2O2分解成H2O和O2，使H2O2不致在体内大量积累。其催化效率比无机催化剂铁粉高10个数量级，反应速率可观察O2产生情况。酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度的特异（专一）性，即一种酶只能对一种或一类化合物起催化作用

2、。例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都催化糖昔键的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖。还原糖产物可用本乃狄试剂鉴定。通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素与酶活性的关系。三、仪器、试剂和材料1．仪器（1）恒温水浴（37℃，70℃）、沸水浴（10℃）、冰浴（0℃）（2）试管18×180共19支（3）吸管lml支、2ml3支、5ml5支（4）量筒100ml1个（5）白瓷板（6）胶头滴管3支2．试剂（1）Fe粉（2）2％H2O2（用时现配）（3）唾液淀粉酶溶液：先用蒸馏水漱口，再含

3、10ml左右蒸馏水，轻轻漱动，数分钟后吐出收集在烧杯中，用数层纱布或棉花过滤，即得清彻的唾液淀粉酶原液根据酶活高低稀释50～100倍，即为唾液淀粉酶溶液。（4）蔗糖酶溶液：取1g鲜酵母或干酵母放入研钵中，加入少量石英砂和水研磨，加50ml蒸馏水，静置片刻，过滤即得。（5）2％蔗糖溶液：用分析纯蔗糖新鲜配制。（6）1％淀粉溶液：1g淀粉和0.3gNaCI，用5ml蒸馏水悬浮，慢慢倒入60ml煮沸的蒸馏水中，煮沸lmin，冷却至室温，加水到100ml，冰箱贮存。（7）0.1％淀粉溶液：0.1g淀粉，以5ml水悬浮，慢慢倒入60ml煮沸

4、的蒸馏水中，煮沸lmin，冷却至室温，加水到100ml，冰箱贮存。（8）本乃狄（Benedict）试剂：17.3gCuSO4·5H2O，加100ml蒸馏水加热溶解，冷却；173g柠檬酸钠和100gNaCO3·2H2O，以600ml蒸馏水加热溶解，冷却后将CuSO4溶液慢慢加到柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅匀，最后定容至1000ml。如有沉淀可过滤除去，此试剂可长期保存。（9）碘液：3gKI溶于5ml蒸馏水中，加1gI2，溶解后再加295ml水，混匀贮存于棕色瓶中。（10）磷酸缓冲液：A液：0.2mol／LNa2HPO4称取28.

5、40gNa2HPO4（或71.64gNa2HPO4·12H2O）溶于1000ml水中。B液：0.lmol／L柠檬酸称取21.01g柠檬酸（C6H8O7·H2O）溶于1000ml水中。Ph5.0缓冲液：10.30mlA液十9.70mlB液pH7.0缓冲液：16.47mlA液十3.53mlB液Ph5.0缓冲液：19.45mlA液十0.55mlB液（11）1％CuSO4·5H.O溶液。（12）1％NaCl溶液。3．材料每组约0.5cm的马铃薯方块（生、熟）。四、操作步骤1．酶催化的高效性取4支试管，按下表操作：操作项目管号12342％H

6、202(ml)3333生马铃薯小块（块）2000熟马铃薯小块（块）0200铁粉00一小匙0现象解释实验现象2．酶催化的专一性取6支干净试管，按下表操作：操作项目管号1234561％淀粉(ml)1100102％蔗糖(ml)001101唾液淀粉酶原液(ml)101000蔗糖酶溶液(ml)010100蒸馏水(ml)000011酶促水解摇匀，37℃水浴中保温10min本乃狄试剂(ml)各2ml反应摇匀，沸水浴中加热5～10min现象解释实验现象3．温度对酶活力的影响取3支试管，按下表操作：操作项目管号123唾液淀粉酶溶液(ml)111PH

7、7.0磷酸缓冲液(ml)222温度预处理5min0℃37℃70℃1％淀粉溶液(ml)222摇匀，保持各自温度继续反应，数分钟后每隔半分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却5min，各加1滴碘液，混匀。观察并记录各管反应现象，解释之。4．pH对酶活力的影响取3支试管，按下表操作：操作项目管号123PH5.0磷酸缓冲液(ml)110pH7.0磷酸缓冲液(ml)001PH8.0磷酸缓冲液(ml)1011％淀粉溶液(ml)010预保温摇匀，37℃水浴

8、中保温2min唾液淀粉酶溶液(ml)检查淀粉水解程度摇匀，置37℃水浴中继续反应，每隔半分钟从第2号管中取出1滴反应液于白磁板上，加碘液检查反应情况，直至反应液不再变色，即停止反应，取出所有管。碘液（滴）各1滴现象解释实验现象5．抑制剂和激活剂操作