实验十、食品中苏丹红染料测定

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1、实验十、食品中苏丹红染料的测定标准依据：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定（高效液相色谱法）一、目的要求学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。二、实验原理苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。三、仪器与试剂（一）试剂1、乙腈色谱纯2、丙酮色谱纯、分析纯3、甲酸分析纯4、乙醚分析纯5、正己烷分析纯6、无水硫酸钠分析纯7、层析柱管：1cm(内径)5c

2、m(高)的注射器管。8、层析用氧化铝（中性100目~200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL水降活，均匀后密封，放置12h后使用。9、氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。11、标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。12、标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。（二）仪器1、

3、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）2、分析天平：感量0.1mg3、旋转蒸发仪4、均质机或匀浆机5、粉碎机6、离心机7、0.45μm有机滤膜四、实验步骤（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。（二）样品处理：1、红辣椒粉等粉状样品称取1g~2g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入10mL~20mL正己烷，超声处理5min，过滤，用10mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层

4、析柱。控制氧化铝表面吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用10mL~30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45μm有机滤膜过滤后待测。2、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品称取0.5g~2g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入约1mL~10mL正己烷溶解,难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。然后按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。3、辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品称取10g~20g(准确至0.01g)样品于离心管

5、中，加10mL~20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL正己烷：丙酮=3：1，匀浆5min，3000rpm离心10min，吸出正己烷层，于下层再加入20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL正己烷溶解残渣后，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。4、香肠等肉制品称取粉碎样品10g~20g(准确至0.01g)于三角瓶中，加入60mL正己烷充分匀浆5min，滤出清夜，再以20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL

6、以下，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。（三）测定1、色谱检测条件（1）色谱柱：ZorbaxSB-C183.5μm4.6mm150mm（或相当型号色谱柱）（2）流动相：溶剂A0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85：15溶剂B0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20（3）梯度洗脱条件流速（mL/min）时间（min）流动相曲线A%B%1.002575线性1.010.02575线性1.025.00100线性1.032.00100线性1.035.02575线性1.040.02575线性(4)柱温：30℃（5）检测波长：苏丹红Ⅰ478nm；苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ

7、520nm；于苏丹红Ⅰ出峰后切换。2、标准曲线制备吸取标准贮备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL，用正己烷定容至25mL，此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56μg/mL，各进样量10μL，绘制标准曲线。3、样品测定：吸取10μL样品处理液，按标准曲线制备检测色谱条件对样品进行测定。与标样对照，根据峰保留时间定性以及相应峰面积定量。五、结果计算X=式中X——样品中苏