肝糖原的提取与鉴定实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划肝糖原的提取与鉴定实验报告　　实验六肝糖原的提取、鉴定与定量　　姓名，学号，专业，级班组，月日　　目的要求：　　1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。　　2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。　　3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。　　4.熟练运用溶液混匀的各种方法。　　5.正确掌握溶液转移的操作。　　6.正确操作使用分光光度计。　　实验原理：　　肝糖原的提取、鉴定　　

2、糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖

3、长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。　　CuSO4十2NaOH═Na2SO4+Cu(OH)2↓　　2Cu(OH)2十C6H12O6═2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O　　2CuOH═Cu2O↓(红色)+H2O　　Cu(OH)　　CuO↓(黑色)+H2O　　肝糖原的定量　　糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在(

4、10?100)?g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。　　实验材料：　　仪器　　1.普通离心机，室温?100℃恒温水浴箱，722型分光光度计，精度为10mg级电　　子天平　　2.剪刀，镊子，研钵　　3.试管架，10mL离心管，mm试管目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全

5、感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　4.刻度吸量管，1000μL微量可调取液器　　5.100mL容量瓶　　6.白瓷反应板　　实验样品和试剂　　1.鸡肝。　　2.95％乙醇。　　3./L(5％)三氯醋酸溶液：称取未潮解的三氯醋酸5g，加蒸馏水溶解至100mL。　　4./LNaCl溶液：称取NaCl加蒸馏水溶解至1000mL。　　5.12mol/LHCl：浓HCl原液。　　6./L(50％)NaOH：称取NaOH50g，用蒸馏水溶解至100mL。　　7.碘试剂：碘l

6、00mg和K1200mg溶于50mL蒸馏水中。　　8.班氏试剂：称取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g溶于蒸馏水800mL中，加热促溶。冷却，慢慢倾人％硫酸铜l00mL，边加边摇。再加蒸馏水至1000mL，混匀，如混浊可过滤取滤液。此试剂可长期保存。　　9./L(30％)KOH溶液：称取KOH30g，加蒸馏水溶解至100mL。　　11.标准葡萄糖液(50mg/L)：称取已干燥恒重的无水葡萄糖25mg，加蒸馏水溶解至500mL。　　12.17mol/L(90％)H2SO4：量取蒸馏水30mL，加浓H2SO4500mL。目的-通过该培训员工可对保

7、安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　13.蒽酮显色剂：称取蒽酮，用17mol/LH2SO4溶解至100mL。此试剂不稳定，以当日配制为宜，冰箱保存可用4?5天。　　实验方法：　　吸取1mL量溶液时使用可调微量取液器，吸取1mL以上量溶液时使用刻度吸量管。　　肝糖原的提取与鉴定操作流程如下。　　鸡肝约1g，剪碎　　＋5%CCl3COOH1ml　　＋　　5%CCl3COO

8、H3ml　　研磨成肝匀浆　　3分钟　　＋5ml95%乙醇，混匀，静置10分钟　　4000r/min）　　上清　　沉淀　　＋蒸镏水2ml　　鉴定方法②