079-肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告

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1、南方ti科丈修生物化学实验报告姓名：符含敏学号：3140090079专业年级：2014级预防医学组另IJ:第三实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验日期2015-1-8合作者杨锐评分教师签名实验地点第三实验室指导老师朱利娜批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字.英文用TimesNewRoman；标题用:现多行、多页空白现象。一、实验目的：提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验二、实验原理：1•低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖

2、原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。2.糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。步脱水生成糠醛衍生物，它再3•糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进与蔥酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。4.糖含量在10-100ug,溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。三.实验材料：1•鸡肝乙醇5%三氯醋酸50%Na0H12mol/LHCl碘试剂班氏试剂普通离心机室温至100°C恒温箱可见光分光光度计天平剪刀银子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板2.

3、30%K0H标准葡萄糖溶液90%浓硫酸蔥酮显色剂四.实验步骤：1•肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5g,剪碎I+5%CC13COOH1ml研磨至乳状

4、+5%CCl3C00H3ml审磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000r/min）沉淀（弃去）上清离心5(取3ml)+3ml95%乙醇，混匀，静置10分钟(4000r/min)上清（弃去）沉淀I+蒸锚水1ml沸水浴°2分钟，溶解沉淀碘试剂2滴糖原溶液lmlI+浓HC15滴询水浴15分钟，冷却+50%Na0H5滴糖原水解液2滴糖原水解液J+班氏试

5、剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原的定量测定：鸡肝0.15g

6、+30%K0H1.5ml（用吸量管）沸水浴15分钟冷却，全部转入100ml容量瓶中加水至标线,▼仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作:试剂(ml)空白管标准管样品管标准葡萄糖溶液1.0糖原提取液1.00.2%恿酮溶液2.52.52.5(用吸量管)混匀，沸水浴10分钟，冷却角在分光光度计620nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度(A)o五.实验结果的记录与分析：1.所测吸光度值记录表标准管糖原提取

7、液吸光度值0.6930.7632.肝糖原含量的计算:肝糖原（g/100g肝组织）=0.763/0.693X0.05X100/0.12X0.1X1.11=5.091实验结果与预估值十分不符2.实验过程中的主要图片:鸡肝研磨充分后后班氏试剂濒色为亮蓝色■搪原水解液2漓后水浴加热/2min后顾色娈、、一*暗离心后上层清液为乙醇涪液,下层为糖原白色粉末沉淀空白管空白管标准管样品管样品管