荧光报告基团选择

《荧光报告基团选择》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划荧光报告基团选择　　荧光探针的选择标准(zz)　　荧光团探针的选择依赖于下面的重要标准：　　A.仪器。比如，光源，滤片，检测系统。　　B.多标记中对探针色彩区分程度的要求。例如，若丹明红-X(RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明或者Cy3的区别明显。　　C.要求的灵敏度。比如，Cy3和Cy5就比其他的荧光团探针要亮。AminomethylcoumarinAcetate(AMCA)　　耦联的AMCA吸收光波

2、长最大为350nm，发荧光则为450nm。对于荧光显微镜来说，AMCA可以用汞灯来激发，用紫外滤板来观察。由于AMCA的信号相对较弱，单标实验中不推荐使用AMCA。AMCA和荧光素的荧光波长只有很小的重叠范围，而和发出长波长荧光的荧光基团没有或者只有极少的重叠，因此它最常用于多标记实验中，比如免疫荧光显微镜和流式细胞仪。由于人眼不能很好的检测蓝色荧光，在多标记的实验中，AMCA耦联的二抗应当被用于检测大量的抗原。AMCA和荧光素一样很快淬灭，使用抗淬灭剂可以减轻。如果使用在流式细胞仪中，AMCA可以用汞灯或者水冷却的氩光灯激发，因为它

3、们发出的光线是在光谱的紫外区。　　FluoresceinIsothiocyanate(FITC)异硫氰酸荧光素目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　耦联的荧光素基团吸收的最大波长为492nm，发射的最大波长为520nm。由于FITC被使用了很长时间而且产量很大，FITC被广泛应用。荧光素的最大缺点是淬灭快，因此要和抗淬灭剂一起使用。　

4、　DTAF是荧光素的一个衍生物，激发和发射波长均和FITC相同。当和链霉亲合素耦联时，因为荧光强度上有明显的区别，最好不使用FITC，而使用DTAF。　　Cyaninedyes花青染料　　Cy2耦联基团激发波长为492nm，发光为波长510nm的绿色可见光。Cy2和FITC使用相同的滤波片。由于Cy2比FITC在光下更稳定。要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂，因为这种抗淬灭剂和Cy2反应，在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。　　Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm，最强

5、发射光为570nm。因为激发光和发射光波长很接近TRITC,在荧光显微镜中，可使用和TRITC一样的滤波片。　　Cy3在氩光灯下可以被激发出50％的光强，在氦氖灯或者汞灯下则约75％。Cy3可以和荧光素一起作双标。Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　Cy5耦联基团的激发波长最大6

6、50nm，发光波长最大670nm。在氪氩灯下它们可被激发出98％的荧光，在氦氖灯下为63％。Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。由于它的最大发射波长在670nm，Cy5很难用裸眼观察，而且不能用汞灯作理想的激发。通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜。在水相封片剂中应当加入　　抗淬灭剂。使用传统的表面荧光显微镜时，不推荐使用Cy5。TetramethylRhodaminIsothiocyanate四甲基异硫氰酸罗丹明　　RhodamineRed-X(RRX)若丹明红X,TexasRed(TR)

7、得克萨斯红这些若丹明的衍生物耦联基团具有不同的吸收波长(550,570,596nm)和最大发射波长。尽管TRITC经常和FITC一起在双标记实验中使用，使用RRX和TR可以得到更好的颜色区分。在使用装有氪氩灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记的实验时，RRX尤其有用，可以和Cy2(或者FITC)和Cy5一起使用，因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间，而且和这两者覆盖都很少。氪氩灯激发光为488nm，598nm和647nm，分别是Cy2(FITC),RRX和Cy5的理想激发波长。因为FITC和PE可以被氩灯的488nm波长激发,在流式细

8、胞仪中用FITC作双标，另一种用藻红蛋白耦联基团要比若丹明好，。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障