核酸的定量测定(定磷法)实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划核酸的定量测定(定磷法)实验报告　　实验四定磷法测定核酸含量　　一、目的　　掌握定磷法测定核酸含量的原理与方法。二、原理　　核酸分子中含有一定比例的磷，RNA中含磷量为％，DNA中含磷量为％，因此通过测得核酸中磷的量即可求得核酸的量。　　用强酸使核酸分子中的有机磷消化成为无机磷，使之与钼酸铵结合成磷钼酸铵。　　PO42-+3NH4++12MoO42-+24H+=(NH4)3PO4·12MoO3·6H2O↓+6H2O当有还原剂存在时，Mo

2、6+被还原成Mo4+，此4价钼再与试剂中的其他MoO42-结合成Mo(MoO4)2或Mo3O8，呈蓝色，称为钼蓝。　　在一定浓度范围内，蓝色的深浅和磷含量成正比，可用比色法测定。样品中如有无机磷，应将无机磷扣除，否则结果偏高。三、实验器材1、粗核酸2、克氏烧瓶50ml。3、小漏斗φ4cm。　　4、容量瓶100ml、50ml。　　5、吸管、、、、。6、试管X18cm。7、722型或XX型分光光度计。8、电炉。9、水浴锅。四、实验试剂目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的

3、安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　1．标准磷溶液：将磷酸二氢钾于100℃烘至恒重，准确称取溶于少量蒸馏水中，转移至500ml容量瓶中，加入5ml5mol/L硫酸溶液及氯仿数滴，用蒸馏水稀释至刻度，此溶液每毫升含磷400μg。临用时准确稀释20倍。2．定磷试剂　　17％硫酸：17ml浓硫酸缓缓加入83ml水中。％钼酸铵溶液：钼酸铵溶于100ml水。　　10％抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100ml水，存于棕色瓶中放于冰箱。溶液呈淡黄色尚可用，呈深黄甚至棕色即

4、失效。　　临用时将上述三种溶液与水按如下比例混合，V(17％硫酸):V(％钼酸铵溶液):V(10％抗坏血酸溶液):V(水)＝1：1：1：2。3.5％氨水。4.30％过氧化氢。　　5.27％硫酸：27ml硫酸缓缓倒入73ml水中。五、操作　　1.磷标准曲线的绘制　　取干试管9支，按表编号及加入试剂。　　核酸含量的测定——标准曲线的绘制　　加毕摇匀，45℃水浴中保温10min，冷却，测定吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标作图。2.总磷的测定　　称取样品，用少量蒸馏水溶解，转移至50ml容量瓶中，加水至刻度。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步

5、了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　吸取上述样液，置于50ml克氏烧瓶中，加入少量催化剂，再加浓硫酸及3粒玻璃珠，克氏烧瓶中内插一小漏斗，放在通风厨内加热，消化至透明，表示消化完成。冷却，将消化液移入100ml容量瓶中，用少量水洗涤克氏烧瓶两次，洗涤液一并倒入容量瓶，再加水至刻度，混匀后吸取置于试管中，加定磷试剂，45℃水浴中保温10min，测A660nm。　　3.无机磷的测定　　

6、吸取样液，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取置试管中，加定磷试剂，45℃水浴中保温10min，测A660nm。4.计算：　　总磷A660nm-无机磷A660nm＝有机磷A660nm　　由标准曲线查得有机磷的质量，再根据测定时的取样毫升数，求得有　　机磷的质量浓度。按下式计算样品中核酸的质量分数：CV×11　　×100%m　　式中W：核酸的质量分数；C：有机磷的质量浓度；V：样品总体积；　　11：因核酸中含磷量为9％左右，1μg磷相当于11μg核酸；M：样品质量。六、思考题　　1.采用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，有何优点及缺点？2.

7、若样品中含有核苷酸类杂质，应如何校正？　　定磷法测定核酸的含量核酸,含量,测定目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　【实验目的】　　掌握定磷法测定核酸含量的原理和方法　　【实验原理】　　核酸分子结构中含有一定比例的磷(RNA含磷量约为%~%，DNA含磷量约为%)，测定其含磷量即可求出核酸的量。　　核酸分子中的有机磷经强酸消化后形成无机磷，在酸性条

8、件下,无机磷与钼酸铵结合形成黄色磷钼酸铵沉淀，其反应为：　　在还原剂存在的情况下,黄色物质变成蓝黑色,称为钼蓝。在一定浓度范围内，蓝色的