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时间:2018-12-25
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1、为了适应公司新战略的发展,保障停车场安保新项目的正常、顺利开展,特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划dna的定量测定实验报告 生物学大实验 实验名称:质粒扩增、提取和鉴定实验实验目的通过对智力扩增、提取和鉴定试验的实验原理介绍和实际操作,加深对分子生 物学基本技术的理解和掌握。实验仪器设备:电子天平、高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、不同型号移液枪若干支、 磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉、制冰机、琼脂糖凝胶电泳仪、超净工作台等。实验原理:质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中,通过对细菌、放线菌和真菌的
2、 培养来实现对质粒的扩增。经过处理的线状dna在外界环境恢复正常的时候不能够复性而质 粒dna可以复性,从而可以实现质粒dna和染色体dna的分离。限制性内切酶能特意地结合 于一端被称为限制性酶识别系列的dna系列之内或其附近的特异位点上,并切割dna。当对 提取的质粒dna进行电泳时,同一质粒dna其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的 泳动速度快。 实验步骤: 一质粒扩增目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解,并感受到安保行业的发展的巨大潜力,可提升其的专业水平,并确保其在这个行业的安全感。
3、为了适应公司新战略的发展,保障停车场安保新项目的正常、顺利开展,特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划 普通lb固体培养基制备:制备lb培养基,倒入灭菌瓶中高压灭菌,待完全冷却后,保存备用。 将大肠杆菌接种于lb培养基中,37℃振荡培养过夜(200转/分) 二质粒dna的提取(碱法)1将菌液倒入的微量离心管中,1XXrpm离心一分30秒,弃去上清液,以得到 较多的细菌沉淀; 2、将微量离心管开口倒置在卫生纸上,使离心管底部的液体流尽。 3、加入100μl用冰预冷的溶液i,剧烈振荡,将沉淀彻底悬浮
4、,然后室温放置5分钟。 4、加入200μl现配的溶液ii,盖紧管口,轻轻快速颠倒离心管,使混合物混匀,冰浴5~10分钟。 5、加入150μl预冷的溶液iii,盖紧管口,温和颠倒混匀,使粘稠地细菌裂解物均匀 地分布于溶液iii中,冰浴5分钟。 6、取上部水相,移入新的离心管,加入2倍体积预冷的无水乙醇,震荡混匀,室温放置10分钟沉淀双链dna,然后4℃,1XXrpm离心10min。 7、弃去上清液,将离心管倒置于卫生纸上,使离心管底部的液体流尽后,加入预冷的 1ml70%乙醇。目的-通过该培训员工可对保安行
5、业有初步了解,并感受到安保行业的发展的巨大潜力,可提升其的专业水平,并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展,保障停车场安保新项目的正常、顺利开展,特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划 8、弃去上清液,将离心管倒置于卫生纸上,使液体流尽,置dna干燥5~10分钟。 9、吸除上清液,将管口倒置于卫生纸上使液体流尽,真空干燥10分钟或室温干燥。10、将沉淀溶于34υlte缓冲液或灭菌水中,储于-20℃冰箱中三dna酶切反应 1、将洁净干燥并经灭菌的eppendorf管编号,用微量移液枪分别加
6、入 dna和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2υl,将管内溶液混匀后加入υl酶 液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可以用微量离心机甩一下,使溶液集中在管底。此步操 作是整个实验成败的关键,要防止错加,漏加。使用限制性内切酶时应尽量减少其离开冰箱 的时间,以免活性降低。 2、混匀反应体系后,将eppendorf管置于适当的支持物上, 37℃水浴锅保温2-3小时,使酶切反应完全。 3、每管加入2υ/ledta,混匀,以停止反应,置于冰箱之保存备用。 四dna的琼脂糖凝胶电泳 1、取5×tbe缓冲液100
7、ml加蒸馏水至1000ml,配成×tbe稀释缓冲液,待用。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解,并感受到安保行业的发展的巨大潜力,可提升其的专业水平,并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展,保障停车场安保新项目的正常、顺利开展,特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划 2、胶液的制备:称取3g琼脂糖置于1000ml锥形瓶中,加入300ml×tbe稀释缓 冲液,加入微波炉里加热至琼脂糖全部融化,取出摇匀,此为1%琼脂糖凝胶液。加热过程中 要不时摇动,使其附于瓶盖上的琼脂糖颗粒进入溶液。
8、加热时应盖上封口膜,以减少水分蒸 发。 3、胶版的制备:想冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭溶液使其终浓 度为υlg/ml。倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速度也不可太快,否则溶液出 现气泡,待胶完全凝固后,拔出梳子注意不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入υ× tbe稀释缓冲液至页面恰好没过胶板上表面 4、加样:取2
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