洁净区沉降菌监测标准操作规程

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1、SOP-QA-009-02PAGE2of5洁净区沉降菌监测标准操作规程2SOP-QA-009-02PAGE3of5目的：建立洁净区中沉降菌的监测规程，保证药品在规定的洁净级别内生产。适用范围：适用于洁净区沉降菌检测的操作。责任：QA洁净度监测人员、QC微生物检验员对本标准的实施负责。内容：1.方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判断洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的

2、洁净度。2.所用的仪器和设备2.1高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。2.2恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行定检。2.3培养皿一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿；使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。2.3.1将培养基加热熔化，冷至45℃时，自无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15mL。2.3.2待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃—35℃恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿宜在2℃—8℃的环境中存放。2.4培养基普通营养

3、琼脂培养基。具体见培养基配置方法。3.测试步骤3.1采样方法将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30分钟，再将培养皿盖盖上后倒置。3.2培养3SOP-QA-009-02PAGE3of53SOP-QA-009-02PAGE4of53.2.1全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。3.2.2在30℃—35℃培养箱中培养，时间不少于48h。3.2.3每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。3.3菌落计数3.3.1用肉

4、眼直接计数，标记或在菌落计数器上点记，然后用5—10倍放大镜检查，是否遗漏。3.3.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。1.注意事项4.1测试用具要作灭菌处理，已确保测试的可靠性，准确性。4.2采取一切措施防止人为对样本的污染。4.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不漏计培养皿边缘生长的菌落，并注意细菌菌落与培养沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。5.1测试规则5.1.1沉降菌测试前

5、，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速控制在规定值内。5.1.2沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。5.1.3测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。5.2测试人员5.2.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。5.2.2静态测试时，室内测试人员不得多于二人。5.3测试时间5.3.1对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统运行不少于10min后开始。5.3.2对非单向流，如10000级，10000

6、0级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。4SOP-QA-009-02PAGE4of54SOP-QA-009-02PAGE5of55.4.1采样点数目及其布置5.4.1.1最少采样点数目沉降的最少采样点数可按表1确定。表1最少采样点数目面积Sm2洁净度级别100300000S＜102～3210≤S＜204220≤S＜408240≤S＜100162100≤S＜200403注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积；对非单向流洁净室，指的是房间面积。在满足最少测点数的同时，还宜

7、满足最少培养皿数，见表2。表2最少培养皿数洁净度级别所需Φ90mm培养皿数（以沉降30分钟计）1001410，0002100，0002300，00025.4.1.2采样点的布置工作区测试点位置离地0.8—1.5m左右（略高于工作面）。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。5.5记录测试报告中应记录房间温度、相对湿度、测试状态。5.6结果计算5.6.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。5.6.2平均菌落数的计算，见式（1）。5SOP

8、-QA-009-02PAGE5of55SOP-QA-009-02PAGE5of5…………………（1）式中：M————平均菌落数M1————1号培养皿菌落数；M2————2号培养皿菌落数；Mn————n号培养皿菌落数；N————培养皿总数。5.7结果评定用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。5.7.1洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。5.7.2若某洁净室（区）内的平均菌落数超过