豆制品中乌洛托品（编制说明）

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1、《食品安全地方标准豆制品中乌洛托品的测定液相色谱-质谱/质谱法和激光拉曼光谱法》编制说明一、标准起草的基本情况（包括简要的起草过程、主要起草单位等）(一)任务来源、起草单位、起草人《食品安全地方标准豆制品中乌洛托品的测定液相色谱-质谱/质谱法和激光拉曼光谱法》列入2012年江苏省食品安全地方标准制定计划项目，并与江苏省理化测试中心、欧普图斯（苏州）光学纳米科技有限公司、苏州药品食品监督检验所等相关承担单位签订委托书，委托书项目编号：JSSPDB2012-004。本项目起草负责人为李新丽，主要起草人有马宁，张厚森，刘芳，贾涛，刘春伟，高宏，吴楚，朱成晶，仲

2、雪，赵厚民，封卫娟等。(二)简要起草过程1、标准任务下达后，2012年9月成立了标准起草工作组；2、查阅资料，采购样品、标准品、色谱柱、试剂耗材等并召开三家承担单位的标准制定沟通会，确定制定方案。3、2012年11月～2013年7月进行方法研究，确定出分析方法，并对方法一和方法二进行了检测结果比对。4、2013年8月～11月，对方法进行再优化，邀请验证单位对方法进行验证，并征求意见、编制标准草案、编写编制说明。二、标准的主要技术内容及依据（一）第一法HPLC-MS/MS法1方法原理乌洛托品可溶于乙腈，不溶于正己烷，试样经乙腈提取后，提取液用正己烷萃取，减

3、少了乙腈提取液中脂溶性的杂质，采用HPLC-MS/MS法测定，梯度洗脱，外标法定量。2前处理方法在选择提取溶剂时考察了水、甲醇、乙醇、乙腈等溶剂，水的提取液浑浊，很难分离出澄清液，容易发生堵塞；乙醇能和正己烷互溶，影响脂溶性杂质的分离，增加基质效应；甲醇和乙腈的提取效率相近，考虑甲醇的沸点低和毒性较大，故选择乙腈。-7-考察了超声提取和震荡提取法，发现超声提取会使目标物发生分解，回收率降低、且数据不稳定；考察了震荡提取的震荡频率、提取时间和提取次数等因素，用阳性样品实验发现，当震荡频率200-300次/分钟时，提取20分钟一次就能达到最大提取值，加标回收

4、率95%以上、精密度很好。在净化方法的选择上，考察了固相萃取小柱净化和正己烷净化，参照SN/T2226-2008,采用离子交换树脂小柱，但因为豆制品中可溶于乙腈的基质复杂，采用小柱并不能消除基质干扰，且因为每个小柱的填充差异，影响了方法的精密度和准确性，选择正己烷净化不但步骤简单，而且消除基质效应比小柱好，精密度也能满足要求。3仪器条件乌洛托品在酸性条件下会分解放出甲醛，采用碱性甲酸铵缓冲盐溶液和乙腈作为流动相不仅可以为质谱的电离源提供足够的带电离子而且可以将整个分离过程维持在一个相对稳定的碱性环境中，可以避免乌洛托品在酸性条件下的分解。实验表明，在碱性

5、色谱条件下比酸性条件下的色谱峰响应值高。豆制品特别是腐竹经过了复杂加工后，基质复杂，对乌洛托品检测干扰很大，即使在前处理中用正己烷进行净化，但基质效应仍然较大，而且相同种类不同品牌豆制品的基质效应差别较大，为此考察了不同比例流动相的等度洗脱、梯度洗脱、不同流速的选择等。实验表明当进样量5μL、流速0.2mL/min、梯度洗脱时可以消除所有基质干扰，用乙腈配置标准曲线，基质提取液加标回收率达到95%～100%。为了获得最佳的检测灵敏度乌洛托品采用电喷雾正模式电离。4测定低限本标准第一法的方法测定低限为5μg/kg。5回收率和精密度因为目前还没有豆制品中乌洛

6、托品的标准限量，回收率和精密度在标准曲线的高、中、低浓度进行加标测定。在阴性样品中加入乌洛托品标准物质，添加的标准品使测试溶液浓度分别为1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L（相当于样品中目标物含量分别为5μg/kg、10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg），进行回收率和精密度实验。经试验发现，腐竹是豆制品中基质干扰最严重的样品种类，常常会是不同品牌的基质干扰都不同，实验室选择了3个品牌的腐竹进行方法研究，这三个样品的产地分别是：成都、上海、南京；其他样品选择了“豆粉、豆腐、素鸡、豆腐干”进行方法试验。方法回收率为86.2%～102.0

7、%；添加浓度为定量限时的精密度RSD=3.58%～4.84%，添加浓度为2倍定量限时的精密度RSD=3.17%～3.89%，添加浓度为5倍、-7-10倍定量限时的精密度RSD小于3%。实验结果见表1～表4。样品名称测定值(μg/L）回收率（%）相对标准偏差RSD（%）123456腐竹10.8760.9040.9340.9440.9640.98287.6～98.24.30腐竹20.8810.8870.9020.9230.9630.97688，1～97.64.31腐竹30.8930.9120.9450.9480.9620.98689.3～98.63.58豆粉

8、0.8760.8840.9060.9340.9560.96287.6～96.23