reach法规第四卷译稿(3)

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1、B.7.重复剂量(28天)毒性(口饲)1.测定方法1.1引言见引言B部分1.2定义1.3测定方法原理测定物质以渐变的剂量每天给测定动物口饲，每组一个剂量标准共持续28天。在喂食的这段时期内每天仔细观察动物有否中毒迹象。在测定阶段中死去的动物要进行验尸，而测定结束后宰杀仍活着的动物并进行解剖。这种方法强调了作为一种独特端点的神经病学作用，而压制了对动物进行仔细临床观察以此来获取足够多信息的需要。这种方法应确定化学物质的神经毒素潜能，这能保证在这方面更深入的调查研究。另外，这种方法可能给出有关免疫学作用和再生器官毒性迹象的暗示。1.4.测定方法描述1.4.1.准备工作随机分配年轻健康的动物到对

2、照组和测定组。笼子的放置可能造成的影响必须减至最小。要确认每个动物并在测定开始前将它们置于笼中至少五天，以使之适应实验室环境。测定物质或通过管饲法或经由食物或饮水喂食。口饲喂食方法取决于研究目的和物质的物理、化学性质。如有必要，测定物质要溶解在或悬浮于合适的溶剂。推荐一旦有可能，首先考虑使用水溶液或悬浮液，其次是油溶液或乳状液（如谷油），最后才是其他溶剂溶液。对于除水以外的其他溶剂必须知其毒性，测定物质在溶剂中的稳定性也需探明。1.4.2.测定条件1.4.2.1.动物样品倾向于使用啮齿目的鼠，尽管其他啮齿目动物也可使用。实验室通常仍使用的品种是年轻健康的成年动物。雌性动物需是从未生育过的的

3、或未怀孕的。在动物断奶后尽可能早地开始给其喂食药剂并且无论如何要在动物九周大以前开始。在研究刚开始时，要减少使用的动物间体重的差异并且不超过每种性别平均体重的±20%。一旦重复口饲剂量研究作为一个初试到一个长期研究来进行，那么应在这两个研究中使用来源于同一种源的合适动物。1.4.2.2.数量和性别在每个剂量水平使用至少10只动物（5只雄的5只雌的）。如果考虑到中期的死亡，就必须在研究完成前在动物数量上增加预计要死掉的个数。另外，一个附属的10只动物组（每种性别各5只）可每天喂以最高剂量水平的测定物质持续28天并在喂食结束后的14天中进行对恢复性或毒效持续性或毒效滞后表现的观察。1.4.2.

4、3.剂量水平一般来说，至少使用三个测定组和一个对照组。除了不喂食测定物质外，必须以对待测定组动物相同的方式来对待对照组动物。如使用某种溶剂来喂食测定物质，则对照组动物需接受使用的最高剂量的溶剂。如果从其它实验数据的评估得知1000mg/kgbw/d的剂量不足以产生任何作用的话，就可进行一个极限测定。如果无法得到任何合适的实验数据，可进行一个范围结果研究以此来帮助选定将使用的剂量。剂量水平的选择需考虑到任何存在的毒效以及可获得的有关测定物质或相关物质的（毒药的）运动实验数据。最高的剂量水平是根据能诱导毒性作用而不致死或重伤的目的来选择的。此后剂量水平的依次递减应根据能验证任何有关剂量大小的反

5、应以及在最低剂量水平不应有任何可见的不好现象（NOAEL）这一原则来选择的。在设定递减的剂量水平时，通常2-4个交叉区间是最理想的。而另外的第四个测定组最好在相间的剂量水平间使用很大区间（如大于10的因子）。对于通过饮食或饮水喂食的情况来说，保证含有的测定物质不影响正常营养或水平衡这一点是很重要的。当测定物质通过食物喂食时，不管是基于动物体重的恒定的食物浓度（ppm）还是恒定的药剂量水平都可采用；必须详细阐明在上述二个选择中选择使用的那种方案。对于经由管饲法喂食的情况，必须每天以类似次数喂给药物并根据需要调整以此来保证一个恒定的基于动物体重的药物剂量水平。一旦重复的剂量研究被作为一个初试到

6、一个长期研究来进行，在两次研究中应使用类似食谱。1.4.2.4.极限测定如果有一个通过食物或饮水喂食的测定，也使用了这个研究描述的过程，其剂量水平是至少1000mg/kg体重/天或在饮食或饮水中占相等的百分比（根据体重确定），而不产生任何可观察到的毒效并且如果来自结构上相关物质的实验数据显示无法得到毒效，那么使用三个剂量水平的全面研究可能不需要了。这个限制测定在除了从人类接触显示应使用更高剂量水平的情况下应用。1.4.2.5.观察期观察时期为28天。计划要进行追踪观察的附属组中的动物要持续至少14天不喂食药剂，以此检查毒效的滞后反应现象或毒效的持续性或恢复情况。1.4.3.测定步骤在28天

7、的时间内每周七天要天天喂食动物以测定物质。每周五天的喂药法有待证明。当测定物质经有管饲法喂食时要使用一根胃管或合适的插管把单一药剂喂给动物。一次喂给液体的最大量是由动物样品的大小决定的。喂食量不能超过1ml/100g体重，除非在水溶液情况下最多可超过2ml/100g体重。除了那些在更高浓度下会产生恶化作用的刺激性或腐蚀性物质外，必须通过调整浓度来减少喂食量的不同，以保证在所有剂量水平上恒定的量。1.4.3.1.综合观察综