reach法规第四卷译稿-40

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1、B.40皮肤腐蚀1.方法1.1.引言对皮肤腐蚀性的两个试管体外测定，鼠皮穿刺的电学反抗（TER）分析和利用人皮模型的测定，已被欧洲选择方法确认中心在技术上认可（ECVAM,联合研究中心，欧洲委员会）（1）（2）（3）。ECVAM的研究变动性证明两个测定都能合理的区别皮肤的腐蚀和不腐蚀，进而，基于人皮模型的测定草案能区别腐蚀影响的程度（已知的严重的皮肤腐蚀，R35，和其它皮肤腐蚀，R34）（2）。也给出了两个测定的描述和步骤选择，利用哪个测定取决于特定大要求和使用者的喜好。又见B部分的总引言。1.2定义皮肤腐蚀性：随测定物质的适用性而产生的皮肤不能变更的组织损害。1

2、.3参考物质没有特定的，可见1.5.3.4和1.7.2.3。1.4鼠皮三次测定测定方法原则测定物质应放在用人为方法杀死的年轻老鼠的毛皮上获得的原形表皮上超过24小时。腐蚀材料应通过它们能产生损失正常完整性和界限功能的能力来证明，这种能力是以在开始水平（5k）下的固有的TER来测量的（4）（5）。有刺激和无刺激的材料不能减少在开始水平以下的TER。染色步骤可以与表面活性剂和酸碱平衡的器官（定义见参考文献（6））的测定步骤合并进行，以减少用这些化学方式（2）（7）得到的错误的阳性结果的数目。1.5.鼠皮三次测定测定方法的描述1.5.1动物为准备圆形表皮需要的年轻的（2

3、0-23天）的老鼠（Wistar或一种可比较的种类）。表面或侧腹的毛用小的动物剪毛机小心的移去，之后仔细清洗动物，浸入溶有抗生素的区域（包含，例如，集中影响细菌生长的链霉素,青霉素,氯霉素和两性霉素）。在第一次洗后应在第三第四天后用抗生素再洗一次，在三天内使用（对于毛皮准备的动物不能大于31天）。1.5.2圆形表皮的准备人为杀死动物。移去每只动物样品的背面皮肤，剥去皮肤上多余的脂肪。毛皮放在聚四氟乙烯试管的末端，保证表皮与试管接触。用圆形橡胶圈按住在试管的末端，保持皮肤的位置并将多余的组织除去。在图1中显示了试管和橡胶圈的尺寸。随后用石油胶状物仔细密封在试管的末端

4、。试管用一个在硫酸镁溶液感受器中的弹簧夹支持（154mM）(图2)。1.5.3测定步骤1.5.3.1测定材料的适用性液体测定物质（150μL）应用于试管内的表皮（图2）。测固体物质时，利用充足量的固体保证整个表皮都被覆盖。在固体顶部加去离子水（150μL），慢慢晃动试管。测定物质应最大程度的接触皮肤。对于一些固体可以加热到30溶解测定物质来得到,或碾磨成颗粒状或粉末状。每个测定物质需三种皮肤，且要求24小时（又见1。5。3。4）。测定物质利用高于30的自来水的喷射来除去直到没有更多的物质可除去。已在试管中固化的物质的除去应利用大于30左右的温水喷射来除去。1.5.

5、3.2TER测定TER通过利用低压交流电桥来测量（例如AIM401或6401或相当物）。测电阻前，皮肤的表面菌种可通过加在表皮上的充足量的70%乙醇来减轻，几秒钟后通过到转试管来除去乙醇，随后用3mL硫酸镁（154mM）水合化组织。电桥电极放在皮肤的任一边来进行k档皮肤电阻的测量（图2）。电阻的大小和电极的长度在鳄鱼皮的接触下，见图1。在电阻测量期间内部（重的）电极夹停在聚四氟乙烯试管的顶部，保证浸入硫酸镁溶液的电极不变。外部（轻的）电极放在感受器内部即在感受器的内的底部。弹簧夹底部到PTFE试管底部的距离不变（图1），因为这个距离影响得到的电阻值。注意到如果测得

6、电阻值高于20k，这是因为覆于皮肤表皮的测定物质。常可移去这一层，例如用套住的拇指密封聚四氟乙烯试管并摇晃大约10秒。弃去硫酸镁溶液并用新的硫酸镁溶液重复测定电阻值。平均的TER结果在并发的阳性和阴性数值落在该方法可接受的范围之内时是可接受的。建议控制测试物质和它们的附属物在可接受阻力范围内方法和仪器描述如下：实验步骤有机的对照物质阻抗范围kΩ阳极10M盐酸（36％）0.5-1.0阴极蒸馏水10－251.5.3.3表面活性剂和中性器官的修饰修正步骤如果表面活性剂或中性器官的测定物质的TER阻值的是小于或等于5千欧，染液渗透率的一个评估可在薄的纱织品上实行。这实验步

7、骤将会确定如果结果是否为错误的阳性(2)。1.5.3.3.1SulforhodamineB染料应用和分离在测定物质的初处理测试之后,150μl的10%(w/v)的sulforhodamineB染料在蒸馏水里面的的稀释物被用于每个皮肤圆盘的表面2小时。然后皮肤圆盘由高于室温的水流喷洗大约10秒以去除任何过度的/无限制的染料。把每皮肤圆盘仔细地从聚四氟乙烯试管移走并放在装有经去离子作用水（8ml）的小瓶内，(例如.20毫升玻璃闪烁瓶)轻轻搅动小瓶5分钟以移去任何过度/自由的染料.然后重复这个冲洗实验步骤，移走皮肤圆盘并放入5毫升含30%(w/v)硫酸钠的小瓶中(SDS

8、)并且一夜