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1、2015届本科毕业论文（设计）高温菌的分离纯化与分子鉴定姓名：赵影院别：生命科学学院专业：生物工程学号：110913038指导教师：刘秀花2015年4月6日2目录摘要1关键词21材料与方法31.1实验材料31.1.1实验对象31.1.2实验试剂31.1.3实验仪器41.1.4培养基41.2细菌的分离纯化41.3菌落形态与革兰氏染色特征观察41.4菌株的分子鉴定41.4.1细菌DNA的提取41.4.216SrRNA基因扩增51.4.316SrRNA基因扩增产物的序列测定51.4.4DNA序列分析61.5产耐热β-半乳糖苷酶的验证实验62：结果及
2、分析62.1菌体菌落形态及染色特征72.2分子鉴定结果72.2.116SrRNA的扩增72.2.216SrRNA的测序结果82.2.3DNA序列分析82.2.4嗜热脂肪芽胞杆菌的验证实验103讨论103.1细菌菌株的鉴定103.2细菌菌株的验证103．3高温菌的研究意义104结论115参考文献116致谢12IIII高温菌的分离纯化与分子鉴定赵影指导老师：梁峰（商丘师范学院生命科学学院，河南商丘476000）摘要：为了能够更好的充分开发利用高温嗜热菌资源，获得一些耐高温的酶类。本实验以采自不同地方的温泉中的污泥为原料，在培养基（DSM88固体培
3、养基，温度70度，PH7.0）中，运用涂布，四区划线的方法，分离纯化原料中的微生物并进行革兰氏染色，并对其16SrRNA的基因进行序列测定和系统分析，结果发现该菌为革兰氏阳性菌，且产芽孢，与典型的嗜热脂肪芽胞杆菌属的菌种有最高同源性；为进一步验证分析结果对其生理生化又做了研究，最后发现该菌在以乳糖为唯一碳源，x-gal作为显色剂的培养基中能够产生蓝色的菌落，这充分说明该菌株能够产生耐高温的β-半乳糖苷酶即确定该菌就是嗜热脂肪芽胞杆菌。关键词：嗜热脂肪芽胞杆菌；16SrRNA；耐高温的β-半乳糖苷酶；进化分析；Purificationandmo
4、lecularidentificationofthermophilicbacteriaZhaoyingSupervisor:LiangFeng（DepartmentofLifeScience,ShangqiuNormalUniversity,Shangqiu476000,China)Abstract:Inordertotakefulladvantageofhightemperaturethermophilesresources,so[]thatwecanaccesstosomeofthehigh-temperatureenzymes.Inth
5、isexperiment,spacollectedfromdifferentpartsofthesludgeasrawmaterial.weusedacoatingmethod,fourdividinglineintheculturemedium(DSM88solidmedium,atemperatureof70degrees,PH7.0)andtheseparationandpurificationoftherawmaterialandmicroorganismsGramstain,and16SrRNAsequencingandanalys
6、issystemofitsgene,ItwasfoundthatthestrainofGram-positivebacteriaandspore-forming,withthetypicalBacillusstearothermophilusGenusspecieshashighesthomologyo;Tofurtherverifytheanalysisresults,Wefurthermakethephysiologicalandbiochemicalexperiments.Finally,thebacteriafoundinlactos
7、easthesolecarbonsource,x-galaschromogenicagentinthemediumcanproducebluecolonies,whichfullyshowsthatthestraincanproducehightemperatureβ-galactosidase.namely,thestrainisidentifiedBacillusstearothermophilusKeywords:Bacillusstearothermophilus;16SrRNA;temperatureofβ-galactosidas
8、e;phylogeneticanalysis;11近年来,极端嗜热菌耐热酶的发现,促进了分子生物学中聚合酶链反应(PCR)技术的发展和应用,更加引起了人们对研究极端
