油菜花粉粒萌发的荧光观察毕业论

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1、安庆师范学院生命科学系毕业论文题目油菜花粉粒萌发的荧光观察指导教师龚莉届别2009届学号2305107姓名施晓丽6油菜花粉粒萌发的荧光观察施晓丽指导老师：龚莉(安庆师范学院生命科学系安徽安庆246011)摘要：研究目的：油菜是我国人民食用油的主要来源作物之一，在我国经济作物中具有重要作用。多年来，科学工作者们通过杂交育种的方法获得了许多优质高产的油菜新品种。为弥补以往观察方法的不足，本研究试图通过对甘蓝油菜的种内自花授粉，不同油菜品种的种间异花授粉这两组试验进行荧光显微技术观察，详细了解花粉粒在花粉管中的萌发过程，从细胞水平探讨种内、种间杂交的亲和性程度，从而为花粉粒的细胞水平研究提供一些理论

2、参考。研究方法：采用荧光显微镜技术，观察自花授粉、异花授粉下花粉粒的萌发生长情况。研究结果：油菜自花、异花授粉的花粉均能够大量萌发，表现出高度的亲和性。关键词：油菜；花粉粒；荧光观察1引言油菜是十字花科植物，原产我国，南北广为栽培，四季均有供产。同时也是我国人民食用油的主要来源作物之一，可以说油菜在我国的经济作物中具有重要的作用。多年来，人们通过杂交育种方法获得了许多优质高产的油菜新品种。但并不是所有的花粉粒在柱头上都能萌发，不能萌发的主要原因有：一、花粉在柱头上不萌发或花粉管不能进入柱头；二、少量的花粉管进入柱头，但伸长受阻，多数不能到达胚囊受精；三、配子不融合或受精卵不能发育成完整的胚，因

3、而出现相当多的无胚或胚发育不完全的种子。对于这些原因科学工作者们做了许多的研究。植物开花传粉后,落在柱头上的花粉粒经识别,亲和的则吸收柱头上的水分和分泌物开始萌发,内壁从萌发孔突出,继续伸长,形成花粉管。为观察花粉粒的萌发,现在植物学实验多数是采集花粉粒,在含有蔗糖、硼酸、琼脂的培养基上培养几十分钟,使其萌发,然后制片置于显微镜下观察。此方法花粉粒的萌发是人工培养的,不能显示其在花柱上的实际萌发情况。花粉粒在柱头上萌发及在花柱中伸长的真实情况,一般采用石蜡切片观察,这种方法费时、费工,效果不好。而利用荧光染料及荧光显微镜可弥补上面两种方法的不足,操作简单,效果显著。罗坤[8]对植物花粉粒的研究

4、。此次研究观察了不同植物花粉粒的产生、形态及其发育阶段，为花粉的应用，例如植物分类学、地质学中油的勘测、考古工作、植物培育试验、医学等各方面都提供了重要信息；肖朋，常桂菊，王保仁[1]以甘蓝型油菜为母本、白菜型油菜和芥菜型油菜为父本进行种间杂交，用扫描电镜和荧光显微镜对异源花粉在柱头上萌发及其花粉管进入柱头进行观察，他们的试验结果表明：花粉管生长表现出几种异常形态，即花粉管短，顶端球状膨大和棒状膨大、分叉，花粉管细长、均匀或不均匀扭曲。从而探讨了异源花粉不能进入柱头的机理，为解决种间或远缘杂交不亲和性及其应用提供了重要参考。同时在这些研究中做出贡献的还有：魏建和，马风杰，黄璐琦等[4]6采用荧

5、光显微技术观察桔梗花粉管的萌发，确认了桔梗自交亲和性及萌发部位，从微观角度提供了桔梗自交亲和的证据；陈彦，周坚[5]用脱色苯胺蓝对紫薇花粉和花粉管进行染色，在荧光显微镜下观察其自然条件下的受粉习性及花粉管生长行为，确定其受精时间，为外源DNA的导入奠定了基础，从而提高了转化率；葛宇，许明，石研[7]以白萝卜为实验材料，从细胞显微结构水平，分别利用荧光显微镜法和电子显微镜法观察花粉在柱头上的萌发情况和花粉管在花柱组织中的生长状况，判断各柱系的自交不亲和程度，为育种工作提供了理论依据。由此可见，对植物花粉的研究在杂交育种方面具有重要作用，在这些研究中，为了克服在普通光学显微镜下只能观察到柱头表面花

6、粉管的萌发，而看不到柱头内部的生长过程的缺点，科学研究者们都采用了荧光显微技术。其实，早在1993年刘国成[9]就采用了荧光诱导方法对山楂花粉管的发育过程进行了观察。在本次的研究中我们也将采取荧光显微技术对油菜花粉粒的萌发进行观察。本研究采用荧光显微技术，主要以甘蓝型油菜为试验材料，通过甘蓝油菜的种内自花授粉，不同油菜品种的异花授粉这两组不同试验的荧光观察，详细了解油菜花粉粒萌发的过程，从细胞水平探讨种内、种间及远缘杂交的亲和性程度，从而为花粉粒的细胞水平研究提供一些理论参考。1材料和方法2.1材料试验材料为安庆师范学院生命科系植物园中种植的垦C1和7H321号油菜植株及其花粉。于2009年3

7、月19日进行人工授粉处理，取样，固定。2.2人工授粉取样授粉分为人工自花授粉和异花授粉。2009年3月19日上午8：00—9：00，选取还未散粉的花蕾先进行去雄套袋，将取下的花粉置于培养皿中保存。于当日上午9：00—10:00对雌蕊柱头进行人工授粉。授粉后2，4，6，8，24小时分别采摘4朵花，取雌蕊放入卡诺氏固定液中固定4小时以上（固定液冰乙酸：无水乙醇=1：3），然后置于70%乙醇中保存，待用