食品生物技术复习纲要

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1、食品生物技术一、基因工程1、限制性内切酶能识别并切断外来DNA分子的某些部位，使外来DNA失去活性，限制外来噬菌体的繁殖，把这类酶称为限制性核酸内切酶。分类：1型，2型和3型。命名：用具有某种限制性内切酶的有机体学名缩写命名。有机体属名第一个字母和种名前两个字母构成基本名称，加上特殊菌株的名称符号，最后的罗马数字表示同一个细菌中分离出来的不同的限制性内切酶。2型：性状：分子量较少的单体蛋白，需镁离子维持活性。NaCl有抑制作用，能被Mg2+激活，巯基有保护作用，对热不稳定，通常是溶于含有50％甘油的缓冲液中贮存于–20℃环境下。取出使用时必须立即置于冰浴

2、中。功能：在特殊微点切割DNA，产生具有黏性末端或其他形式的DNA分子片段。作用：特异位点上切割DNA，产生特异的限制性内切酶切割的DNA片段；建立DNA分子限制性内切酶物理图谱；构建基因文库；用限制性内切酶切出相同的黏性末端，以便进行DNA重组。2、DNA连接酶：能将两段DNA拼接起来的酶，催化两条DNA之间相邻的5磷酸基和3羟基形成磷酸二酯键。分类：T4DNA连接酶由大肠杆菌T4噬菌体DNA编码，和大肠杆菌连接酶由大肠杆菌染色体编码。三种方法：第一种方法是用DNA连接酶连接具有互补性粘性末端DNA片段；第二种方法是用T4DNA连接酶直接将平头末端的D

3、NA片段连接起来，或用末端脱氧核苷酸转移酶给具平头末端的DNA片段加上多聚(dA)或多聚(dT)尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来（同聚物加尾连接）；第三种方法是先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然各有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。3、DNA聚合酶共同特点：都能把脱氧核糖核苷酸连续加到双链DNA分子引物链的3’-OH末端，催化核苷酸的聚合，而不发生从引物模板上解离的情况。大肠杆菌DNA聚合酶1：具有5-3DNA聚合酶活性，3-5外切核

4、酸酶活性（水解错配的碱基对），5-3外切核酸酶活性（切除变异的片段）。用途：用切口平移的方法标记DNA；使用其5-3外切核酸酶活性降解寡核苷酸作为合成cDNA第二链的引物；用于对DNA分子3突出尾进行标记，用于序列分析。、Klenow片段：没有5-3外切酶活性。T4DNA聚合酶：没有5-3外切酶活性。持续合成能力最强。TaqDNA聚合酶：有5-3外切酶活性。75-80度，ph7.8/。4、逆转录酶：催化以单链RNA作为模板生成双链DNA的反应。有三种活性：RNA指导的DNA合成；DNA指导DNA合成反应；RNA的水解。CDNA文库的建立。5、基因载体。基

5、因载体是一类能自我复制的DNA分子，其中的一段DNA被切除而不影响其复制，可用以置换或插入外源(目的)DNA而将目的DNA带入宿主细胞。功能：为目的基因提供进入受体细胞的转移能力；为目的基因提供在受体细胞中的复制能力或整合能力；为目的基因提供在受体细胞中的扩增和表达能力。条件：能在宿主细胞内进行独立和稳定的DNA自我复制。在外源DNA插入后，仍能保持稳定的复制状态和遗传特性；有多种限制性内切酶切点，但每种切口最好只有1个（单一酶切位点）；具有能够直接观察的表型特征（即有选择标记）。例如抗药性标记，蓝白斑试验。有相当的拷贝数，即每个宿主菌可能容纳的最多数；

6、易于分离纯化。6、质粒独立于细菌染色体外的双链环DNA分子。能自主复制。生物学特性：质粒是细菌染色体外能自主复制的环形双链DNA分子；几乎所有的细菌都含有质粒；质粒DNA分子可以持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定地条件下又会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体地复制而复制；质粒的不亲和性：两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳定地共存的现象；质粒DNA在添加真核复制信号和启动子后，可以构建出能在原核和真核细胞中均可复制的穿梭质粒，并在真核细胞中表达，因此这类载体在基因工程中应用广泛。7、λ噬菌体载体λ噬菌体DNA中间约三分之二的

7、序列为中间基因簇(centralgenecluster)，位于两端的为DNA左、右臂。λ基因组的中间基因簇序列可被外源DNA片段取代（非必需区）,而不影响噬菌体感染细菌及形成噬菌斑的能力。λ噬菌体载体既可作为克隆载体，也可作为表达载体，在基因库筛选中，λ噬菌体作载体与细菌质粒相比，具有易操作、阳性克隆数多等特点，现广泛用于各类基因库的构建。分类：置换型载体：两个酶切位点。可切除后由外源DNA取代；插入型载体：一个酶切位点。切开后插入外源DNA。8、科斯质粒①具有噬菌体的高效感染力。而在进入宿主细胞后不形成子代噬菌体仅以质粒形式存在。②具有质粒DNA的复制

8、方式。重组DNA注入宿主细胞后，两个cos位点连接形成环状DNA分子，如同质粒一