临床化学常用分析技术

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1、第十四章　临床化学常用分析技术 　　本章考点　　1.临床化学常用分析方法　　光谱分析、电泳技术、离心技术、层析技术、电化学分析技术的基本原理和应用　　2.临床化学方法的建立　　（1）方法建立的根据　　（2）方法建立的过程　　（3）方法的评价　　（4）方法建立后的临床观察第一节　临床化学常用分析方法　　一、光谱分析（分光光度技术）　　定义：　　利用物质具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量的技术，称为光谱分析技术。　　它具有灵敏、快速、简便等特点，是生物化学分析中最常用的分析技术。　　分类：　　　　（一）可见及紫外分光光度

2、法　　分光光度法的理论基础是朗伯－比尔定律。　　1.Lamber－Beer定律：　　A=k·b·c　　A为吸光度　　k——吸光系数　　b——光径，单位：cm。　　c——溶液浓度，单位：g／L　　在可见-紫外分光光度法中，通常在测定未知样品浓度的同时，与同一个已知浓度的标准物作比较，可以利用以下公式计算而求出其浓度,即比较法。　　　　其中Cx和Ax为标本管浓度和吸光度，Cs和As分别为标准管浓度和吸光度。　　2.摩尔吸光系数：在公式“A=k·b·c”中，当c=1mol／L，b=1cm时，则常数k可用ε表示称摩尔吸光系数。　　ε的意义是：当液层厚度为1

3、cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度值。　　ε是物质的特征性常数。　　　　不同物质的摩尔吸光系数不同　　3.比吸光系数：在公式“A=k·b·c”中，当c为百分浓度（w／v），b为cm时，则常数k可用E%表示，称为比吸光系数或百分吸光系数。　　（二）原子吸收分光光度法　　根据待测元素的气态原子能吸收相同原子所发射的特定波长的光，其吸收特性遵循Lambert-Beer定律，即在一定条件下，原子的吸光度同原子蒸气中待测元素基态原子的浓度成正比。　　　　　　第14页　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　常用的定量方法有：　　1.标准

4、曲线法：　　将一系列浓度不同的标准溶液按照一定操作过程分别进行测定，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。在相同条件下处理待测物质并测定其吸光度，即可从标准曲线上找出对应的浓度。由于影响因素较多，每次实验都要重新制作标准曲线。　　2.标准加入法：　　把待测样本分成体积相同的若干份，分别加入不同量的标准品，然后测定各溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，标准品加入量为横坐标，绘制标准曲线，用直线外推法使工作曲线延长交横轴，找出组分的对应浓度。　　本法的优点是能够更好地消除样品基质效应的影响。　　3.内标法：　　在系列标准品和未知样品中加入一定量样本中

5、不存在的元素（内标元素），分别进行测定。以标准品与内标元素的比值为纵坐标，标准品浓度为横坐标绘制标准曲线，再根据未知样品与内标元素的比值依曲线计算出未知样品的浓度。　　本法要求内标元素应与待测元素有相近的物理和化学性质。只适用于双通道型原子吸收分光光度计。　　（三）荧光分析法　　有些物质物质受到有较高能量的光（如紫外光）照射时，在吸收了某些波长的光后，会发射出不同波长和不同强度的光（光致发光），照射停止，发光亦随之消失，这种光称为荧光。　　利用荧光强度进行分析的方法，称为荧光法。　　在荧光分析中，待测物质分子成为激发态时所吸收的光称为激发光，处于激

6、发态的分子回到基态时所产生的荧光称为发射光。　　荧光分析法测定的是受光激发后所发射的荧光强弱。　　在一定条件下，荧光物质的浓度愈大，发射的荧光强度也愈强。　　（四）火焰光度法（火焰发射光谱法）　　是待测元素利用火焰作为激发源，成为激发态原子回降至基态时发射的光谱强度进行含量分析的方法，属于原子发射光谱分析的一种。　　样品中待测元素激发态原子的发射光强度I与该元素浓度C呈正比关系，即I=aC，式中a为常数，与样品组成、蒸发和激发过程有关。　　火焰光度法通常采用的定量方法有标准曲线法、标准加入法和内标法。　　临床工作中，火焰光度法主要用于体液中的钠、钾

7、测定，钠的特征谱线为589nm（黄色），钾的特征谱线为767nm（深红色）。　　（五）透射和散射光谱分析法　　主要测定光线通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度，常用法为比浊法，又可称为透射比浊法和散射比浊法。　　临床上多用于对抗原或抗体的定量分析。　　二、电泳分析　　在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。　　常用的电泳分析方法：　　1.醋酸纤维素薄膜电泳：　　醋酸纤维素是指纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯，由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。　　这种薄膜对蛋白质吸附小，能消除电泳中出现的“托尾”现象。　　具有分离速度快

8、、样品用量小的特点。适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。　　2.凝胶电泳：　　　　　　第14页