《层析分离方法》word版

《《层析分离方法》word版》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、层析分离方法概述■层析法――是一种使不同分子相互分离的过程，当一混合样品被导入一固定相的支持体中，而另一流体(移动相)通过时，由于样品各组分与固定相和移动相相互作用的大小不同，使各组分通过固定相支持体的速率不同而得分离。层析法的特点：能分离一系列结构较为相似的成分，以达到一般分离方法难以达到的目的。■层析常见种类及用途:a.柱层析――分离量较大，主要用于分离制备；b.薄层层析――主要用于分析鉴定,也可用于半微量制备。c.纸层析――主要用于分析鉴定，也可用于半微量制备。■层析法按分离原理大体上又可以分为(1)吸附层析(利用吸附能力的差别进行分离)，常用的吸附

2、剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等；(2)分配层析(利用在二种不互溶的溶剂中分配比不同进行分离)，常用的支持剂为硅胶、硅藻土、纤维粉等，反相硅胶(键合硅胶)、液滴逆流层析则是分配层析与逆流分溶的发展；(3)离子交换层析(利用离子解离强度不同进行分离)，常用的离子交换树脂有强酸性(磺酸型)、强碱性(季胺型)、弱酸性(羧酸型)、弱碱性(三级胺型)；(4)电泳(利用电流通过时，离子趋电性不同进行分离)，常用的有纸电泳、琼脂电泳、凝胶电泳。(5)其他有气体层析、凝胶层析、亲和层析等，■层析方法的选择：(1)非极性的成分常选择氧化铝或硅胶吸附层析；(2)极性较大则采用分配层

3、析或弱吸附剂吸附层析；(3)酸性、两性成分可用离子交换层析，有时也可用吸附层析及分配层析。■各类化合物适宜的层析方法：a.一般生物碱的分离可用硅胶或氧化铝层析，对极性较高的生物碱也可用分配层析，而对季胺型水溶性生物碱也可用分配层析或离子交换层析。b.甙类的层析分离往往决定于甙元的性质，如皂甙、强心甙，一般可用分配层析或硅胶吸附层析。c.芳香油、甾体、萜类(结合成甙除外)包括萜类内酯，往往首选氧化铝及硅胶层析，若在氧化铝柱上有次级反应，则宜用硅胶吸附层析。d.黄酮体、单宁等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附层析。e.有机酸、氨基酸一般可选用离子交换层析，有时也用分配

4、层析，有些氨基酸也可用活性炭吸附层析。f.多肽、多糖等大分子化合物，常用凝胶层析、亲和层析、反相硅胶（键合硅胶）。第一部分柱层析第一章硅胶层析一、层析用硅胶层析用硅胶一般以SiO2·xH2O表示，系多孔性的硅氧环Siloxane(a)交链结构，由于其骨架表面具有很多硅醇Silanol(b)基团，能吸着多量水分，此种水分几乎成游离状态存在，因此当加热至100℃左右能可逆地被除去。硅胶的活性水分含量有关(见表7-1)，表7-1氧化铝和硅胶含水量与活性的比较硅胶加入水量（%）活性氧化铝加入水量（%）0I05II315III625IV1038IV15含水量高则吸附

5、力减弱，当游离水含量高达17%以上，吸附能力降低，而可作为分配层析载体。硅胶于500℃加热能不可逆地失去结合水(一般170℃以上即有少量结合水失去)，从硅醇结构变成硅氧环结构，若加热至1,100℃则结合水尽失。由于硅胶的吸附能力主要与硅羟基数量有关，因此加热温度过高吸附能力反而降低。有时硅胶层析具有吸附层析与分配层析的双重性质，甚至还有极弱的离子交换作用。层析硅胶应是中性无色颗粒，但是由于制作过程常可带有酸性，如果酸性不强于pH5，一般已可使用。■商品层析硅胶合格的判定a.PH值－一般先检查其是否中性。取硅胶一份混悬于100份水中放置，应得澄清的中性溶液。

6、如滤液为酸性，应水洗至中性，再行活化处理。b.铁离子的检查－一般将硅胶混悬于盐酸中，搅拌，如含铁离子则与盐酸结合成复合物而显黄色。有铁离子存在即预示有其他金属盐存在的可能性，因此最好以盐酸洗涤处理。在特殊情况下，硅胶须经乙醚、氯仿等有机溶剂预洗，至洗出液蒸干无残渣为止。由于硅胶容易吸水，因此用前最好经120℃烘24小时活化，可不作活性测定。■硅胶的改良：向层析硅胶中加入一种复合试剂，以改良吸附性能，提高分离效果，称改良吸附剂。例如以硝酸银处理的硅胶对不饱和烃类有极好的分离作用。以1~10%复合试剂的水或丙酮溶液，与硅胶混匀，待稍干后于110℃干燥即可。表7

7、-2常用改良吸附剂复合试剂选择性分离物0.1~0.5N酸或碱pH敏感物质（生物碱、酸性、酚性、两性物质）AgNO3具有双键或三键物质硼酸、硼酸钠、碱式醋酸铅多羟基化合物亚硫酸钠醛类氯化铁羟基喹啉类硫酸铜胺类铁氰化锌磺胺类二、硅胶吸附层析的应用■硅胶层析的优、缺点：优点：(1)有些化合物用氧化铝层析，吸附剂副反应较多，而且某些副反应即使用中性氧化铝仍难以避免。而硅胶作吸附剂虽也有个别发生异构化，但一般副反应较少；(2)某些酸性、酚性物质、色素等易与氧化铝结合而不宜使用氧化铝层析，硅胶则无此特性；(3)氧化铝层析样品损失较多，而硅胶层析样品回收率较高。缺点：(

8、1)即分离效果有时较氧化铝为差，对杂质的吸附能力差；(1)样品处理