生物制药》课程实验大纲

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1、《生物制药》课程实验大纲编号：1300901课程名称：生物技术制药英文名称：BiologicalPharmaceuticalTechnology实验指导书名称：生物制药实验指导书一、学时学分总学时：32学分：2实验学时：8二、实验目的本课程实验的目的是使学生掌握生物技术制药中的基因工程制药、抗体制药、细胞工程制药、酶工程制药、微生物工程制药的基本原理、主要方法和技术，从而使学生能够将理性知识与感性认识有机地结合起来，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识以及分析问题和解决问题的能力。同时通过实验，培养学生观察、思

2、考、分析问题和解决问题的能力，实事求是，严肃认真的科学态度，以及勤俭节约、爱护公物的良好作风。三、实验基本原理纯培养技术、无菌操作技术、分子生物学基本原理及技术、免疫学原理及技术、细胞工程原理及技术、蛋白质工程原理。四、实验基本要求在实验内容的安排上，注意使学生加深对生物制药工艺基本理论的理解。实验的难易程度适中，严谨全面。根据实验指导书完成课内实验任务，客观认真填写实验数据并进行结果分析、每次实验及时上交实验报告。五、考核与报告实验考核以平时实验预习报告、实验态度、实验操作及实验处理几部分组成，占该门课程成绩30％，实验报告按实

3、验指导书提供的统一格式进行书写。11六、主要仪器设备CO2培养箱、20W紫外灯、红灯、血球记数板、搅拌器、高速冷冻离心机、冷冻干燥箱、真空干燥箱、高压灭菌装置、超净工作台、倒置显微镜、冰箱、液氮罐、精密天平、微量加样器、烤箱、细菌过滤器、10L气升式发酵罐、摇床、显微镜（带油镜）、紫外及可见光分光光度计、电泳仪、pH计等。七、实验项目与内容提要序号实验名称内容提要每组人数实验时数实验要求实验类别备注01甲甲壳质、壳聚糖的制备采用虾壳做原料，制备甲壳质和壳聚糖34选开验证02液体深层发酵生产抗生素学习微生物制药的液体深层发酵技术，掌

4、握抗生素效价的检测及发酵产物的鉴定34选开综合03抗生素的分离和鉴定（薄层层析法）采用薄层层析法分离各种抗生素（如链霉素、卡那霉素等），以枯草芽孢杆菌作为生物显影菌株确定斑点位置，求得Rf值，进行鉴定。34必开综合04植物细胞/组织培养与细胞活性鉴定采用无菌操作的方法，培养植物愈伤组织（MS培养基），和采用液体悬浮培养的方法培养植物悬浮细胞，掌握鉴定细胞死活的方法。34选开验证八、适用专业生物技术九、实验地点生物与食品工程学院实验室11实验一甲壳质、壳聚糖的制备【实验目的】了解制备甲壳质、壳聚糖的工艺流程；掌握甲壳质的提取、制备原

5、理及壳聚糖的检测方法。【实验原理】甲壳质存在于甲壳类动物(如虾、蟹)的外壳，昆虫表皮，软体动物(如贝类、乌贼)的器官、菌类(如菇类、霉菌)的细胞壁。自然界每年合成量高达100亿吨，仅次于植物纤维素。甲壳质是1823年法国科学家Odier首次从蟹壳中提取出来的，由于甲壳质的性质非常稳定，溶解性很差，限制了它的应用。经一个多世纪世界各地科学家对它在结构上进行改良、修饰，并开发应用研究，它的衍生物壳聚糖在工业、农业、畜产、渔业、食品、化妆品及医药行业上得到广泛应用，尤其是近十多年来，壳聚糖的动物试验及临床观察得到科学家们的肯定，誉为人类

6、第六生活要素(蛋白质、脂肪、维生素、矿物质和壳聚糖)。是一种功能性食品。从虾壳提取甲壳质，工艺主要是将虾壳的成份分离，虾壳中含有无机盐(主要为碳酸钙)蛋白质和甲壳质。利用碳酸钙能溶于盐酸的机理，将其离析。蛋白质在碱性条件下能被水解生成短肽及氨基酸，它们能溶于水，与甲壳质分离。本实验首先采用盐酸浸泡虾壳除去钙质，接着利用氢氧化钠煮沸除去蛋白，之后水洗；用高锰酸钾与硝酸氧化脱色干燥得白色制品为甲壳质。甲壳质在碱性条件下脱去乙酰基，生成聚胺糖。工业上很难100％脱去乙酰基，所以工业制得的实际上是甲壳质和聚葡胺糖两个结构单元的结合，称为壳

7、聚糖。壳聚糖结构中有胺基(－NH2)，具碱性，因此，它能溶于很多酸，如硫酸、盐酸、胃酸等，可以用游离氨基含量的来检测乙酰基的脱去程度。【仪器、材料与试剂】1实验材料与试剂虾壳；3％~4%的氢氧化钠；50％的氢氧化钠；5％~6%的盐酸；5%的高锰酸钾；1%的硝酸；1mol/L的盐酸；0.1mol/L的氢氧化钠；溴酚兰指示剂。2仪器设备烧杯1000mL；三角瓶500mL；三角瓶100mL；大试管夹；水浴锅；烘箱；碱式滴定管；铁架台；磁力搅拌器；电炉等。【实验步骤】1虾壳处理：将虾壳洗净，粉碎，称重。2甲壳质制备：用5％~6%的盐酸于室

8、温（20℃）浸泡虾壳1124小时，不断搅拌。盐酸体积（ml）与虾克重量（g）比为10（V/W=10）；取沉淀水洗3次后加入3％~4%的氢氧化钠（V/W=10）煮沸1~2小时，取沉淀水洗；加0.5%的高锰酸钾搅拌反应约1小时，沉淀水洗;再加入1%的硝