蛋白质体学生科四王昌恩

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1、蛋白質體學生科四王昌恩488340107主題：Plasmiddisplay簡介：Plasmiddisplay利用據附著能力的材質作分析，在這個方法中使用一個DNA附著蛋白和質體DNA間蛋白質和DNA序列的非共價結合，第一個被利用的DNA蛋白是乳糖抑制子，乳糖抑制子由LacI基因所表現出來，並緊密的結合在特定的DNA序列上lacO，就如同下圖所表示，一個108具有12個胺基酸所組成的Peptidelibrary去和乳糖抑制子的C端去做融合，藉著選殖質體pMC5下遊的lacI基因並包括了並排的lacO基因，在細胞內這個質體會直接合成乳糖抑制子和12個胺基酸

2、序列組成的小段peptide，緊接著會形成4隅體的形狀，去附著在質體上的lacO的位置上，在打破細胞後，這一段peptide和質體的複合物利用具有選擇性的免疫抗體將特定的peptide-plasmid複合體給選質出來。fig.1Plasmiddisplay技術動機：在這一個方法中，peptide會展現多價的形式，在乳糖抑制子中，以4隅體的形式附著在DNA後，每一個質體附著上兩個4隅體，因此這一個方法對於選殖低到中附著力的附著物是非常適合的，Gates等人更發展出一個乳糖操作組headpiece雙隅體作用DNA附著的區域，這個headpiece雙隅體可以

3、呈現出較少的peptidelibrary數目，因此更適合去選殖出高附著力的附著物，儘管DNA附著的在headpiece雙隅體的機制上不是很清楚，但這一個方法的peptidelibrary會受限於DNA轉型進入細菌內的效率。1997年Cwirla等人的報告中指出，其成功了分離了一個對thrombopoietin受器的nanomolarpeptide的競爭物，依照我們有興趣的觀點來看，作者不僅使用了peptideonplasmid也使用了phagedisplay和ribosomedisplay，它使用的是VIII的phagedisplay、ribosome

4、display和乳糖抑制子利用各種不同的展示方式，更進一步增加了IC50s由20mM到60nM，然而他使用了更進一步的區間為IC50s由20mM到60nMpeptide突變株，然而他使用headpiece雙隅體方式被授命為高附著力的peptide，AF12505，具有2nm的IC50s，這個AF12505的雙隅體展現出了0.5nm的IC50s，具有可以作為人類重組凝血因子的潛力，儘管回顧者並不清楚，但是這這個作者定論peptideonplasmid選擇上是在生成高附著性peptide附著物最具有效果方法，其應用的重要性是可以利用高價的分子來做pepti

5、de的附著，高的價數可以在早期附著一些低附著性的附著物，然而如果已經知道這個附著體是屬於高附著的這樣我們僅需要使用低價數的分子即可以挑選。參考資料：HeningLin(2002)ScreeningandSelectionMethodsforLarge-ScaleAnalysisofProteinFunction,Angew.Chem.Int.Ed,41,4402-4425主題：SpatiallyAddressableMethods前言：Spatiallyaddressable的方法，就是利用在microtiterplate和patch利用固態的固定獨特

6、的address來分辨peptide和蛋白質，所以所有的蛋白質都可以到堆得到原來的DNA序列，我們常常使用microtiter或是96-wellplate來做分析的工作，近年來更開發出將蛋白質以物理的固態方式固定在平板上，以製成蛋白質晶片。Microtiter-PlateAssay96-wellplate的使用可以歸朔到1950年代，microtiter　plates被使用在ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay)上面，自從這一個技術在70年代被開發出來之後，ELISA是敏感度很高的一種檢測方式，可以去測量抗體和抗原

7、間的結合，藉著抗原吸附在96-wellplat的壁上並和帶有酵素的抗體相結合，在洗去沒有附著的抗體之後去偵測抗體上所附著的那個酵素活性，然後我們使用篩選的方式來篩選蛋白質和peptide　library的方式就相似於ELISA，蛋白質和peptide的溶液在分配到每個well，並利用適當的分析方式在每個well中表現。fig1.微量滴定盤的使用(http://140.112.78.220/~juang/BCT/Chapters/Chap4-2.htm)ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay)：酵素連結免疫分析法已朝向

8、普遍化，因為非常靈敏且不必如免疫螢光術和放射免疫分析法需要特殊設備。此法的原理是以一種酵素連結