《草履虫的生殖》word版

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1、草履虫的培养与接合生殖李乃健（2012302630003）纪星宇（2012302630004）杨小丹（2012302630001）陈佑坤（2012302630002）（同等贡献）武汉大学生命科学学院2012级生技一班第四组【摘要】本文介绍通过简便方法采集、培养常见原生动物草履虫，观察草履虫接合生殖现象的过程，对实验中现象进行讨论并对以后类似的实验提出了一些意见和建议。【关键词】草履虫、接合生殖、原生动物【前言】草履虫是原生动物中经典的模式动物，通常用来展示原生动物的基本结构和生命活动。1937年，圣奈伯伦首次观察到纤毛虫的接合生殖现象；1956年，麦亚克发现溶液中的

2、K/Ca比例升高能诱导多种草履虫进行接合生殖。本实验在前人基础上做出了一定的改良，对过去积累的经验进行了一些检验，尤其是对草履虫培养方法和接合生殖的调控因素进行了重点探究。[1]1.材料与方法1.1材料新鲜稻草、烧杯、滤纸、酒精灯、玻璃棒、过滤漏斗、玻璃导管、广口瓶、标签纸、表面皿、微吸管、试管、PH试纸、镜台尺、培养皿、离心机、棉球、恒温箱、托盘天平、量筒、碱性品红溶液1.2方法1.2.1草履虫的采集与鉴种1.2.1.1配制稻草培养基取新鲜稻草（注意清洗以除去肥料和农药）10g和Na2CO31g，加入1L清水于烧杯中煮沸10-15min，直至液体成为清亮的黄褐色。

3、趁热过滤后煮沸10min，在烧杯上蒙上双层洁净纱布，保温在20-30℃，培养3d直至液面出现灰白色薄膜。[2]通入充足空气备用。1.2.1.2采集自然水体中的草履虫在水流缓慢，有机质丰富的水体中取带有微小白色浮渣的自然水。注意水样不要混入泥沙渣滓，运输时不要封口。[3]1.2.1.3草履虫的单克隆培养在表面皿中放适量蒸馏水，在体视显微镜下吸取单个草履虫（可利用其趋电性分离以便操作），分别加入不同的表面皿中。每个水样取九只草履虫。确认吸取的为单个虫体后，再次吸取虫体加入到10ml稻草培养基中，将试管分别依次编号为1、2、3等。注意每次操作后立即清洗滴管再继续操作（后同

4、）。将试管保温24℃培养7d直至肉眼可见大量虫体，注意保持培养液的水质，每2d更换一半培养基（从底部吸取一半培养液后添加一半新鲜培养基，注意无菌操作），稳定PH在7.0-7.2。[4]1.2.1.4草履虫的鉴种分别吸取各试管中的草履虫，碱性品红溶液染色后于显微镜下测量观察。1.2.2草履虫横二分裂的观察取分裂旺盛的草履虫培养液暗室培养3d。在载玻片上滴一小滴稻草培养基，用体视显微镜每隔0.5h连续观察。1.2.3草履虫接合生殖的观察1.2.3.1扩大克隆培养取18株草履虫的纯系培养液转入已加入足量稻草培养基的试管内，塞上棉球并编号，22℃恒温培养7d。1.2.3.2

5、富集草履虫分别取各纯系培养液于对应编号的离心管内，500rpm离心3min，去上清液；加入蒸馏水，重复离心，去上清液。再加入极少量蒸馏水以获得草履虫纯系浓集液。若草履虫在克隆培养时繁殖旺盛，则可直接吸取含密集虫体的表层培养液进行后续试验。1.2.3.3混合草履虫纯系浓集液取等量草履虫纯系浓集液，分别两两混合于小表面皿中并编号为“某×某”，恒温22℃培养。若直接取草履虫培养液混合，则混合后加入等量的蒸馏水再进行培养。培养时可使用湿房保湿（后同）。（此操作实际性不高，改良见2.4）1.2.3.4观察接合生殖混合培养两小时后起，每隔30min在体视显微镜下观察表面皿中的虫

6、体。观察到许多虫体相互粘连时，说明该混合液对应的两株草履虫即为相对接合型。继续观察有关现象并记录。2.结果在实验过程中，我们观察到了许多原来没有预料到的情况和现象，根据这些变化，我们在实验过程中对实验方案和方法做出过多次调整。现将实验结果依次列出如下：2.1草履虫种类鉴定经染色观察，试验中接种并存活的草履虫均为尾草履虫。2.2草履虫横二分裂的过程在染色鉴种的过程中，我们观察到了如左图所示的一只正在分裂的草履虫。在实验过程中，我们又偶然拍摄到了如右图所示的两只尚未完全分离的草履虫，其联合游泳的姿势说明其正在进行横二分裂。二者头尾相连，连锁行动。2.3草履虫接合生殖过程

7、将草履虫高密度混合培养后几分钟内，草履虫开始集群。集群通常以少数虫体聚集为引，进而逐渐吸引周围游动的虫体，表现出“滚雪球”的放大效应，从而形成数个肉眼可见的白色草履虫团块。晃动培养液使虫体散开，当草履虫在刺激后恢复为安静状态时，又会看到虫体自发地重新形成聚集团块。每次形成的团块大小、位置不完全相同。时有聚于边缘的现象。草履虫聚集团块十几分钟后，聚集现象从大群集团转为小群体集团，通常为三五成群集合成一个小团块。群体多并排游动，多呈覆瓦状排列，游动时向群体中前端最靠前的虫体一侧旋转游动。草履虫小团块接下来的十几分钟内，草履虫团块继续分散为草履虫对（右），在这个过程中