《胚胎生殖细胞》word版

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1、人胚胎生殖细胞向心肌细胞诱导分化及质谱分析的研究王士珍,朱旻,冯琦,陈永珍（苏州大学医学部人体解剖与组织胚胎学系，江苏苏州215123）摘要:目的分析人胚胎生殖细胞(hEGCs)向心肌细胞分化过程中蛋白质表达谱的改变。方法组织块培养法体外培养人EG细胞，采用抗坏血酸诱导人EG细胞向心肌细胞分化，通过免疫荧光法检测诱导后细胞中心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达；分别提取人EG细胞及诱导分化2周后细胞蛋白质，采用iTRAQ标记、液相色谱(LC)分离总蛋白，串联质谱(MS/MS)鉴定差异蛋白。结果诱导后细胞阳性表达cTnT；通过质谱分析和数

2、据库搜索共鉴定出349种蛋白，其中27种蛋白差异显著。结论人EG细胞能诱导分化为心肌细胞；蛋白质组学方法可高通量筛选人EG细胞向心肌细胞分化相关的重要蛋白。关键词：人胚胎生殖细胞；心肌肌钙蛋白T；质谱MassSpectrumAnalysisofHumanEmbryonicGermCellsInducedtoDifferentiateintoCardiomyocytesWANGShi-zhen,ZHUMin,FENGQi,CHENYong-zhen(DepartmentofHumanAnatomyandHistoembryology，

3、MedicalSchoolofSoochowUniversity，Suzhou215123，China)Abstract：ObjectiveToanalyzethedifferenceofproteinprofilesbetweenhu-manembryonicgermcells(hEGCs)andcardiomyocytesdifferentiatedfromhEGCs.MethodsTissuewasculturedinvitrotoobtainhEGCs,andthenwhichwereinducedtodifferentia

4、teintocardiomyocytesbyAscorbicAcid.TheexpressionofcardiacTroponinT(cTnT)isdetectedbyImmunofluorescenceondifferentiatedcells;CelltotalproteinsofthehEGCsandhEGCsinducedtodifferentiatefor2weekswereextractedrespectivelyandlabeledbyisobarictagsforrelativeandabsolutequantita

5、tion(iTRAQ).Thelabeledproteinswereisolatedbyliquidchromatography基金项目：苏州大学医学发展基金资助项目(EE134710)收稿日期：2011-03-17作者简介：王士珍(1980-)，男，山东菏泽人，理学硕士，研究方向为人胚胎生殖细胞。通讯作者：陈永珍(LC),andthenthedifferentexpressingofproteinswereidentifiedbyTandemmassspectrometry(MS/MS)inhEGCsanddifferentiat

6、edcells.ResultscTnTwaspositiveexpressionindifferentiatedcells;349proteinswereidentifiedbyMSanalysisandDatabasesearch,amongwhich27proteinsweredifferentexpressionsignificantly.ConcusionshEGCsareinducedtodifferentiatedintocardiomyocytes;Proteomicapproachcanscreentheimport

7、antproteinsinahighthroughputwhicharerelatedtodifferentiationofhEGCsinducedtocardiomyocytes.Keywords:humanembryonicgermcells;cTnT;MassSpectrum人胚胎生殖细胞（humanembryonicgermcells，hEGCs，人EG细胞）是胚胎生殖腺嵴中的原始生殖细胞（primordialgermcells,PGCs）经体外培养获得的一种胚胎干细胞。人EG细胞与源于胚泡内细胞群（innercellmas

8、s,ICM）的ES细胞相似，能在体外未分化状态下无限增殖，并在合适条件下可分化形成多种类型细胞。近年研究表明人EG细胞在不同条件下可向神经细胞[1-2]、心肌细胞[3-4]、骨骼肌细胞[5]等类型细胞分化，其中向心肌细胞的分化尤其引起